吉非替尼及培美曲塞对EGFR 19外显子突变的人肺腺癌PC9细胞株的放射效应的实验研究

作     者：赖祥丽 

作者单位：广西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：冯国生

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肺腺癌 PC9细胞 吉非替尼 培美曲塞 放疗增敏 

摘      要：目的吉非替尼(Gefitinib,Iressa)、培美曲塞(Pemetrexed)在肺腺癌的治疗中起着重要的作用。本研究计划通过体外实验,初步比较吉非替尼及培美曲塞对于EGFR 19外显子突变的肺腺癌细胞株PC9的生长抑制和诱导凋亡作用,并对比两者联合放疗时的放射增敏作用及探讨其作用机制,为今后局部晚期EGFR 19外显子突变的肺腺癌的治疗提供一定的实验依据。方法本研究通过培养PC9细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测吉非替尼和培美曲塞在不同浓度、不同时间对PC9细胞的生长抑制作用,计算出20%抑制浓度,即IC20( 20% inhibition concentration),并选择IC20作为实验浓度。实验分为空白组、吉非替尼组、培美曲塞组、单纯放疗组、吉非替尼+放疗组、培美曲塞+放疗组。采用克隆形成实验检测IC20浓度的吉非替尼、培美曲塞在不同的放射剂量下(OGy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy)对PC9细胞影响,通过单击多靶模型(y=1-(1-exp(-k*x))^N)拟合存活曲线。流式细胞术检测各组的凋亡率及细胞周期。Western blot检测各组CDC20蛋白(cell division cycle 20 homolog)的表达水平,探讨其与放射敏感性的关系。结果1.吉非替尼、培美曲塞对PC9细胞具有生长抑制作用,并且呈时间-浓度依赖性。吉非替尼作用48小时的IC20约为0.014μmol/L;培美曲塞作用48小时的IC20约为0.084μmol/L。2.培美曲塞+放疗组、吉非替尼+放疗组的Dq、D0及SF2均低于单纯放疗组;吉非替尼+放疗组的增敏比SER ( sensitization enhancement ratio)为1.1,培美曲塞+放疗组SER为1. 4,培美曲塞的放疗增敏效应高于吉非替尼。3.吉非替尼、培美曲塞、放疗均可增加凋亡率,药物联合放疗可以提高放射线诱导的凋亡,但培美曲塞联合放疗的凋亡率比吉非替尼联合放疗凋亡率高,再次验证培美曲塞的放疗增敏效应高于吉非替尼。细胞周期检测提示吉非替尼可以使细胞阻滞在G1/Go期,培美曲塞使细胞阻滞在S期,与放射线联合作用后,两组的S期细胞比例减少,G2/M期的比例增多(P0.05)。4.药物联合放疗前后的CDC20蛋白表达水平发生了显著改变;吉非替尼、培美曲塞及放疗对CDC20的表达无明显影响,与单纯放疗组对比,吉非替尼或培美曲塞联合放疗后CDC20的表达明显上升,且培美曲塞+放疗组较吉非替尼+放疗组显著升高。结论吉非替尼、培美曲塞对EGFR19外显子突变的PC9肺腺癌细胞均有放射增敏作用,且培美曲塞较吉非替尼更强。两药的放射增敏机制之一可能与CDC20的增加导致放射敏感的G2/M期比例增多,而放射耐受的S期减少有关;CDC20蛋白的表达可能提高PC9细胞的放射敏感性。