非酒精性脂肪肝大鼠血清TNFα、脂联素及肝脏PPARγ的表达

作     者：鲁冰冬 

作者单位：大连医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姜春萌

授予年度：2007年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：非酒精性脂肪肝 PPARγ TNFα 脂联素 甘正复方 

摘      要：目的:非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)发病率逐年增加,它不仅仅是单纯的肝脏脂肪变性,病情进展可致终末期肝病,威胁人类健康。其发病机制尚不完全清楚,目前尚缺乏公认的效果理想的治疗药物。本研究旨在通过高脂饮食制作大鼠非酒精性脂肪性肝病模型,检测血清肿瘤坏死因子α(TNFα)、脂联素(Adiponectin)水平,观察大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ)蛋白和mRNA表达,探讨它们在非酒精性脂肪性肝病发病机制中的作用,并根据中医理论组成甘正复方,了解甘正复方治疗NAFLD的疗效及作用途径。 方法:30只雄性SD大鼠正常喂养1周后,随机分为3组:正常组、模型组和治疗组,每组10只。正常组喂普通饲料;模型组和治疗组喂高脂饲料,实验动物自由饮水进食。造模第13周起正常组和模型组以蒸馏水10ml/kg鼠重灌胃,每日一次;治疗组予甘正复方溶液10ml/kg鼠重灌胃,每日一次,直至造模第16周末。造模第16周末处死大鼠,取血清和肝组织标本。用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性。采用放免法测定血清TNFα和Adiponectin水平。肝组织标本石蜡切片,行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下评估肝组织脂肪变性程度及炎症活动度计分。分别以蛋白质免疫印迹法(Western blot)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织PPARγ蛋白和mRNA的表达。两组间实验数据的比较采用成组设计的两样本均数t检验;等级资料采用秩和检验。 结果: 1.体重及肝/体重指数:模型组体重、肝/体重指数分别为488.02±12.98、3.301±0.086%,较正常组(368.88±20.39、2.846±0.078%)显著增加(t=15.59,12.397;P均﹤0.01);治疗组为426.95±10.07、2.951±0.054%,与模型组比较明显下降(t=11.758,10.936;P均﹤0.01)。 2.病理学观察:①脂肪变性程度:正常组肝细胞无脂肪变性;模型组肝细胞普遍发生脂肪变性,内含较大的脂肪滴,其肝组织脂肪变性程度与正常组相比有显著差异(P0.01);治疗组肝细胞脂滴数量明显减少,其肝组织脂肪变性程度明显轻于模型组(P0.01)。②炎症程度:正常组肝组织基本无炎症细胞浸润;模型组肝小叶内出现汇管区炎症,炎症活动度计分明显高于正常组(P0.01);治疗组炎症活动明显轻于模型组(P0.01)。 3.血清生化指标:①血清ALT和AST:模型组ALT、AST分别为60.86±3.28、235.54±21.97,较正常组(20.31±3.89、131.53.±9.23)显著增高(t = 25.18,13.8 , P值均﹤0.01) ,而治疗组分别为52.45±2.44、185.32±5.13,较模型组显著下降(t=6.50,7.04,P均﹤0.01)②血清TNFα:模型组为3.40±0.18,较正常组(1.35±0.09)明显增高(t=32.58,P﹤0.01),治疗组为1.57±0.11,较模型组明显降低(t=27.48, P﹤0.01)。③血清Adiponcetin:模型组为6.21±0.39,较正常组( 12.14±0.83)明显降低( t=20.36,P﹤0.01),治疗组为9.33±0.45,较模型组明显升高。(t=16.47, P 0.01)。 4.肝组织PPARγ的表达:与正常组相比,模型组肝组织PPARγ蛋白和mRNA的表达明显减弱(t =414.88、26.299, P均0.01);治疗组肝组织PPARγ蛋白和mRNA的表达显著高于模型组(t = 84.319、5.848, P均0.01)。 结论: 1.血清TNFα的增多和Adiponectin的减少对NAFLD的发生有重要作用。 2. PPARγ表达下降可以促进肝脏脂肪变性及炎症。 3.甘正复方可减轻肝脏脂肪变性及炎症程度,是有效的NAFLD治疗药物,其分子机制可能是通过激活PPARγ的表达发挥作用。