应用流式细胞术检测口腔鳞癌颈淋巴结隐匿性转移

作     者：张恩礁 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：卢利

授予年度：2007年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：流式细胞术 隐匿性转移 微转移 口腔 颈淋巴结转移 

摘      要：目的 应用流式细胞术检测cNpN口腔鳞癌颈淋巴结隐匿性转移，并与半连续切片HE染色法比较，探讨流式细胞术检测淋巴结隐匿性转移的方法学意义。并进行颈淋巴结隐匿性转移率与肿瘤原发灶部位、病理分级、临床T分期三个临床病理因素的相关性分析，探讨检测颈淋巴结隐匿性转移的临床意义，并为进一步探讨隐匿性转移对于患者预后的影响做好准备工作，以期为临床上制定口腔鳞癌患者的治疗方案提供相关信息。 材料与方法 1、临床资料与标本 取术后常规病理检查结果阴性的33例口腔鳞癌患者颈清扫术后44侧颈淋巴结标本共470枚，-70℃冰箱保存，其中61枚较大淋巴结(最大直径≥1.0cm)沿纵向剖开，一半行流式细胞术检测，一半行间隔400μm的半连续切片HE染色检查。409枚较小淋巴结(最大直径1.0cm)按区进行流式细胞术检测。 2、流式细胞术 网搓法将淋巴结标本制成单细胞悬液，以CK14单克隆抗体进行间接免疫荧光染色(荧光素FITC标记二抗)，标记淋巴结内转移的上皮成分，再联合PI染色根据细胞周期分选细胞亚群，应用流式细胞仪，通过前向角散射和侧向角散射双参数，以矩形框和对角框选取有关细胞建立二维点图。以非癌淋巴结标本的G、G期细胞群设立横纵坐标，将点图分为四个象限。若标本在第二象限内出现的细胞数，即两种荧光标记双阳性的细胞数高于0.1％，则确定为阳性淋巴结。 3、半连续切片HE染色 将另外半枚淋巴结固定，石蜡包埋，以每400μm为间隔取一张4μm厚切片，行苏木素—伊红染色，两位病理医师独立阅片，仔细检查淋巴结内的微小转移灶。 结果 1、流式细胞术检测61枚较大淋巴结中有13枚阳性，较小淋巴结(409枚)按分区统一检测112组，2组阳性。流式细胞术检测全颈淋巴结的隐匿性转移率为3.2％(15／470)。 2、流式细胞术和HE染色法检测较大淋巴结的隐匿性转移阳性率分别是21.3％和6.6％，差异有统计学意义(χ=7.11，P0.01)。HE法检出的阳性淋巴结全部被流式细胞术所检出。 3、淋巴结的隐匿性转移率与临床肿瘤T分期、病理分级、肿瘤发生部位三因素经统计学分析均无相关关系(P0.05)。 结论 1、流式细胞术可以提高淋巴结隐匿性转移的检出率，与半连续切片HE染色法有差异，可以作为口腔鳞癌颈淋巴结隐匿性转移的检测方法。 2、隐匿性转移率与肿瘤原发灶部位、病理分级、临床T分期无相关关系。