炎症通过NF-κB/PP2Ac信号通路促进胰腺癌转移的机制研究

作     者：汪明云 

作者单位：苏州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陶敏

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：LPS NF-κB PP2Ac 炎症 胰腺癌 

摘      要：目的:炎症在胰腺癌进展中扮演着了重要角色。有研究发现,在炎症刺激下,抑癌基因蛋白磷酸酶2A（protein phosphatase 2A,PP2A）表达被抑制。然而,炎症是否通过抑制PP2A参与了胰腺癌的进展尚未得到证实。本实验探讨炎症在促进胰腺癌转移中信号通路核因子kappa B（nuclear factor kappa B,NF-?B）/PP2Ac的作用。方法:1.采用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）处理胰腺癌细胞,建立体外炎症模型2.采用二丁基二氯化锡（dibutyltin dichloride,DBTC）处理C57BL/6小鼠,建立小鼠慢性胰腺炎模型3.通过Real time-PCR,Western blot检测炎症对体外、体内模型中PP2A催化性C亚基（PP2A catalytic subunit,PP2Ac）表达的影响4.通过液相蛋白芯片和荧光素酶报告基因检测LPS对胰腺癌细胞NF-κB通路的激活作用5.通过Western blot检测LPS对胰腺癌细胞激酶信号通路的激活作用6.通过MTT检测LPS对胰腺癌细胞增殖能力的影响7.通过Transwell检测LPS对胰腺癌细胞侵袭力的影响。结果:LPS可显著抑制胰腺癌细胞PP2Ac的表达,在小鼠慢性胰腺炎模型中胰腺组织PP2Ac亦呈低表达。NF-?B通路为炎症反应中至关重要的信号转导通路,LPS可导致IKK持续磷酸化、IκBα磷酸化和降解,以及p65入核,激活胰腺癌细胞NF-?B通路。分别用IKKα显性负性突变体（dominant negative IKKα,DN-IKKα）、IκBα显性负性突变体（DN-IκBα）、Bay 11-7082（IκBα抑制剂）、EF-24（IKK抑制剂）阻断NF-?B通路,削弱了LPS对胰腺癌细胞PP2Ac的抑制作用,说明LPS抑制胰腺癌细胞PP2Ac的表达是通过NF-?B通路依赖性途径。同时荧光素酶报告基因证实LPS通过NF-?B通路依赖性途径抑制PP2Ac的转录。进一步研究发现,LPS通过抑制PP2Ac的表达激活胰腺癌细胞JNK、ERK、Akt、PKC激酶信号通路。另外,细胞生物学行为研究显示LPS对胰腺癌细胞生长没有影响,但通过PP2Ac依赖性途径促进胰腺癌细胞侵袭。结论:LPS通过NF-κB信号通路依赖性机制抑制PP2Ac的表达,促进胰腺癌演进。我们的研究为炎症驱动肿瘤进展提供了新的思路。