柿叶提取物抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究

作     者：谭宏棣 

作者单位：广西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：周燕文;黄仁彬

授予年度：2009年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：柿叶水提物 柿叶总黄酮 心肌缺血再灌注 氧自由基 心肌酶 梗死面积 

摘      要：目的:研究柿叶水提物及其总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用并对其机制进行初步探讨。 方法:选取心电图正常SD大鼠,随机分为9组,每组10只,雌雄各半:假手术(Sham)组、心肌缺血再灌注损伤(MIR)组、柿叶水提物低剂量(WPLL)组、柿叶水提物中剂量(WPLM)组、柿叶水提物高剂量(WPLH)组、柿叶总黄酮低剂量(PLFL)组、柿叶总黄酮中剂量(PLFM)组、柿叶总黄酮高剂量(PLFH)组和维拉帕米(Ver)组。缺血前30min经十二指肠注射给药。采用在体大鼠结扎冠状动脉左前降支30min后,再灌注60min,建立心肌缺血再灌注损伤模型。再灌注60min后,测定下列各项指标:1.利用MS4000生物信号定量记录分析系统观察并纪录在急性缺血和再灌注状态下血流动力学指标(HR、LVSP、LVDP、LVDEP和±dp/dtmax)的变化。2.从腹主动脉采血3ml,离心,取上层血清,按试剂盒说明测定AST、CK、CK-MB、LDH、LDH1,SOD、GSH-Px的活性、MDA含量;取缺血区心肌组织,按试剂盒说明书测定组织中ATP酶活性。3.从腹主动脉采血3ml,离心,取上层血清,按试剂盒说明,测定一氧化氮合酶(NOS)活性,TTC法测量心肌梗死面积。4.各鼠取缺血区的心肌组织,常规制作组织切片,光镜下观察心肌组织病理结构变化并拍照;免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白表达。 结果:1.与MIR组比较,再灌注30min(r30min)时,WPLM、WPLH、PLFM、PLFH、Ver组的HR高于MIR组(P0.05),而LVDP低于MIR组(P0.05);再灌注60min(r60min)时,WPLM、WPLH、PLFM、PLFH、Ver组HR、LVSP、+dp/dtmax高于MIR组(P0.05),而LVDP、LVDEP、-dp/dtmax低于MIR组(P0.05)。2.与MIR组比较,柿叶提取物能显著降低血清中各项心肌酶活性和MDA的含量,提高SOD、GSH-Px的活性,同时提高组织中ATP酶的活性(P0.01或P0.05)。3.与MIR组比较,WPLM、WPLH、PLFH心肌梗死面积明显低于MIR组(P0.01或P0.05);WPLM、WPLH、PLFM、PLFH组血清NO含量明显高于MIR组(P0.01或P0.05),tNOS和cNOS活性明显高于MIR组(P0.01或P0.05),而iNOS活性明显低于MIR组(P0.01或P0.05)。4.组织病理学观察,发现柿叶提取物各组都能在一定程度上减轻缺血再灌注心肌细胞的损伤;与MIR组比较,WPLM、WPLH、PLFM、PLFH组Bcl-2蛋白表达明显增高(P0.01或P0.05),而Bax蛋白表达及Bax/Bcl-2的比值明显降低(P0.01或P0.05)。 结论:柿叶提取物对急性心肌缺血再灌注损伤具有一定保护作用,并呈一定的量效关系。其机制可能与抗脂质过氧化损伤、保护ATP酶活性、提高cNOS活性、降低iNOS活性、改善心功能和抑制心肌细胞凋亡有关。