血浆miRNAs预测非小细胞肺癌患者放疗敏感性的研究

作     者：徐燕梅 

作者单位：第三军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孙建国

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：microRNAs 血浆 肺癌 放射治疗 辐射敏感性 

摘      要：背景和目的 肺癌是发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一，其主要的病理类型为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）。放射治疗是肺癌的重要治疗手段，据统计，约60%-70%的NSCLC患者在疾病的不同阶段需接受放射治疗。但即使是根治性放疗也不能彻底消除肿瘤，常规分割放疗(conventional fractionated radiotherapy，CFRT)2年复发率高达60%–70%，进一步提高肺癌放疗疗效是目前需迫切解决的问题。辐射抵抗严重影响放疗疗效，放疗前对患者辐射敏感程度进行评估，有助于制定最佳的放疗计划，提高放疗疗效，但目前临床缺乏敏感、有效的疗效预测分子。 微小RNA（microRNAs，miRNAs）是一类保守的内源性非编码小RNA，在转录后水平调控靶基因的表达。在多种肿瘤的发生、发展过程中均起重要调控作用，最新研究发现，其与放化疗抵抗、肿瘤干细胞特性维持、上皮-间叶转化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）等生物学特征也密切相关。miRNAs表达具有组织特异性，在血浆中可稳定表达，并可进行定量检测分析，因此血浆miRNAs有望成为肺癌疗效预测及治疗靶点的新型分子标记。 方法 1.检索GEO数据库，以放疗敏感肺癌细胞株H460和放疗抵抗肺癌细胞株H1299为研究对象，获取经2Gy电离辐射后随时间变化的基因表达谱，经组织特异性分析、miRNAs预测分析、GO分析、Pathway分析等一系列生物信息学处理，获取NSCLC放疗敏感性miRNAs表达谱。结合本课题组前期研究及文献报道，筛选用于预测NSCLC患者放疗敏感性的miRNAs分子。 2.收集我院拟行单纯放疗的NSCLC患者血浆，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测患者血浆关键miRNAs表达水平。按照RECIST1.1实体瘤疗效评价标准以及局部无进展生存期（progression free survival，PFS）将患者分为放疗敏感组（CR+PR;中位局部PFS）和放疗抵抗组（SD+PD;≤中位局部PFS），比较两组间血浆miRNAs表达水平是否具有统计学差异。 结果 1.获得了NSCLC放疗敏感性差异基因表达谱和mRNA-miRNA-network，筛选出19个放疗敏感性相关miRNAs，其中放疗抵抗关键miRNAs14个：hsa-miR-1、hsa-miR-1297、 hsa-miR-153、 hsa-miR-193a-3p、 hsa-miR-206、 hsa-miR-302e、hsa-miR-328、 hsa-miR-372、 hsa-miR-495、 hsa-miR-520a-3p、 hsa-miR-520b、hsa-miR-520d-3p、hsa-miR-520e、hsa-miR-613;放疗敏感关键miRNAs5个：hsa-let-7c、hsa-miR-137、hsa-miR-203a、hsa-miR-34c-5p、hsa-miR-98。结合前期研究成果，共筛选获得4个miRNAs用于后续实验（hsa-let-7c、hsa-miR-18a、hsa-miR-495、hsa-miR-203a）。 2.入组行单纯放疗NSCLC患者39例，按近期疗效分组，放疗敏感组18例，放疗抵抗组21例。放疗敏感组中hsa-let-7c、hsa-miR-18a的表达水平显著高于放疗抵抗组（P0.05）。 3．随访截止2014年3月15日，8例患者因疾病未进展删失。中位局部PFS4个月（1-9.2个月），按照中位局部PFS分组，放疗敏感组14例，放疗抵抗组17例，放疗抵抗组与放疗敏感组相比，hsa-let-7c、hsa-miR-18a、hsa-miR-495、hsa-miR-203a的表达差异均不具统计学意义（P0.05）。 结论 hsa-let-7c、hsa-miR-18a血浆表达水平与NSCLC放疗近期疗效呈正相关，可作为NSCLC放疗疗效预测的新型分子。