组织蛋白酶L介导Ox-LDL诱导单层HUVECs通透性增加及其机制探讨

作     者：贾小英 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：危当恒

授予年度：2012年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

主      题：组织蛋白酶L 氧化低密度脂蛋白 通透性 自噬 凋亡 

摘      要：【目的】 观察组织蛋白酶L（cathepsin L,CATL）在氧化低密度脂蛋白（oxidized lowdensity lipoprotein, Ox-LDL）诱导单层脐静脉内皮细胞（HUVECs）通透性增加中的作用及其机制探讨。 【方法】 （1）用不同浓度Ox-LDL处理HUVECs24h，Transwell和荧光分光光度法检测HUVECs通透性变化;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印记技术（Western blot）分别检测HUVECs CATL、TET2、VE-cadherin、自噬和凋亡指标的mRNA及蛋白表达情况;用CATL活性检测试剂盒检测HUVECs CATL活性水平;MDC染色观测HUVECs自噬水平，Hochest染色和流式细胞术检测HUVECs凋亡水平。 （2）用不同浓度CATL inhibitor预孵育HUVECs24h，再加入50mg/LOx-LDL处理24h，检测指标同前（1）。 （3）用TET2siRNA转染HUVECs，Western blot检测Beclin-1、LC3、Caspase-3和VE-cadherin蛋白表达。 【结果】 （1）用Ox-LDL（0、25、50和75mg/L）处理HUVECs，实验结果显示：随着Ox-LDL浓度的增加，CATL mRNA表达差异无统计学意义（P0.05），但其蛋白表达及活性显著增加（P0.05）;Bcl-2mRNA表达呈Ox-LDL处理浓度依赖性降低（P0.05），Beclin-1蛋白表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ降低（P0.05）;Bcl-2mRNA表达增加（P0.05）。 【结论】 CATL介导Ox-LDL对血管内皮细胞自噬和凋亡的调节以及内皮细胞单层通透性的改变，TET2参与此过程。