灯盏细辛有效组分视神经保护与钙拮抗作用的相关性研究

作     者：盛艳梅 

作者单位：成都中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孟宪丽

授予年度：2005年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：灯盏细辛 有效组分 视神经保护 钙拮抗 RGCs培养 45Ca跨膜测量技术 体外高眼压模型 细胞凋亡 

摘      要：青光眼是全世界主要的致盲眼病,视神经损害是其最重要的病理改变,因此,视神经保护问题是当前视觉科学领域急待攻克的难关之一。视神经损害的共同通路是视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡。研究表明,钙拮抗药能通过多种环节阻断视网膜神经节细胞凋亡,起到视神经保护作用。灯盏细辛具有祛风散寒、活血通络止痛的功效,主要用于血栓性及心脑血管疾病等。现代研究证明它对青光眼视功能有改善作用。 本课题拟建立灯盏细辛视神经保护有效成分的筛选评价方法,采用Ca同位素技术,揭示灯盏细辛钙拮抗作用与视神经保护之间是否存在一定相关性,以探讨灯盏细辛治疗青光眼视神经损伤的物质基础及作用机理。实验方法及结果如下: 1.通过Ca跨膜内流测量技术筛选实验发现,灯盏细辛中各组分对电压依赖性钙通道钙离子内流的影响不尽一致,其中黄酮类及咖啡酰类有效组分钙拮抗作用明显。 2.通过体外常压视网膜神经细胞培养实验,发现灯盏细辛各组分均能不同程度的促进体外视网膜神经细胞存活,且黄酮类和咖啡酰类有效组分活性较强。 3.通过建立体外高压视网膜神经细胞培养模型,考察了灯盏细辛主要有效组分对体外高压诱导细胞凋亡的影响。免疫组化染色检测结果显示,黄酮类有效组分能明显抑制视网膜神经节细胞中Fas、Caspase-3蛋白的表达;Tunel-POD法检测结果显示,黄酮类有效组分亦具有抑制视网膜神经节细胞凋亡的作用。 结果表明,黄酮类组分为灯盏细辛视神经保护的主要物质基础。综合各实验结果,通过初步相关性分析,表明灯盏细辛视神经保护与钙拮抗作用有较好的相关性。