手霉素及其与顺铂联合应用对人卵巢癌细胞3AO作用机制的研究

作     者：顾来梅 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：张正茂;单保恩

授予年度：2008年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：手霉素 凋亡 卵巢癌 顺铂 3AO Survivin NF-κB(P65) 

摘      要：目的:研究手霉素(Manumycin)及其与抗癌药物顺铂(DDP)联合应用对人卵巢癌细胞3AO的体外抑制作用,分析手霉素抑制3AO细胞的增殖及诱导其凋亡的可能机制,探讨手霉素用于卵巢癌临床治疗的可行性。 方法:1体外培养人卵巢癌细胞3AO,采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay, MTT)比色法检测手霉素对该细胞增殖的影响。2流式细胞术(flow cytometry, FCM)测定手霉素对3AO细胞周期分布和凋亡的影响。3经Giemsa染色光学显微镜观察3AO细胞的形态学改变,透射电镜观察3AO细胞的超微结构改变。4提取手霉素作用前后3AO细胞的DNA,进行琼脂糖凝胶电泳分析。5流式细胞术间接分析手霉素处理后3AO细胞Survivin、NF-κB(P65)蛋白的表达水平。6 MTT比色法检测手霉素与顺铂联合应用对3AO细胞增殖的抑制作用,采用金氏公式分析相互作用指数(Interaction Index),评价两药联合应用后的作用,如相互作用指数0.85表示相加作用,相互作用指数0.85。 结论:1手霉素具有抑制卵巢癌细胞3AO的增殖及诱导其凋亡的作用,为卵巢癌的临床治疗提供了理论依据和实验基础。2手霉素具有抑制3AO细胞的增殖、诱导其凋亡的作用,初步推测其机制在于:1)下调3AO细胞的Survivin蛋白表达,影响细胞周期进程,使3AO细胞阻滞于G2/M期。2)下调3AO细胞的NF-κB(P65)蛋白的表达,NF-κB(P65)的下调可能增强3AO细胞对手霉素的敏感性,进而抑制3AO细胞的增殖并诱导凋亡。3手霉素与顺铂联合应用可增强对3AO细胞的增殖抑制作用。