全反式维甲酸联合放射线照射对食管癌细胞TE13作用研究和对CyclinD1、VEGF及E-cadherin表达的影响

作     者：邓秋媛 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：董稚明

授予年度：2008年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：食管癌 全反式维甲酸 放射线 CyclinD1 VEGF E-cadherin 

摘      要：目的:我国是食管癌的高发国家之一,细胞周期素D1(CyclinD1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor , VEG F)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)分别在肿瘤增殖、侵袭及转移不同阶段发挥重要作用。全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)是一种理想的诱导分化剂,可以诱导多种肿瘤细胞分化、并逆转其恶性表型。单用ATRA毒副作用大,易产生继发性耐药。本实验研究了多种浓度、不同时间条件下ATRA对人食管癌细胞株TE13体外增殖情况的影响;单用ATRA和ATRA联合低剂量射线,探讨其对TE13凋亡、周期的影响以及是否具有协同增效作用。另外还探讨了单用ATRA和ATRA联合低剂量射线,对TE13细胞CyclinD1、VEGF和E-cadherin的表达改变的影响以及三者之间的相关性;为食管癌的临床治疗提供理论依据。 方法: 1体外培养TE13细胞。 2以化疗药物ATRA和60Coγ射线为处理因素。 3 MTT比色法测定不同浓度ATRA处理组分别作用12h、24h、48h和72h后,对TE13细胞的吸光度(OD值)和细胞增殖抑制率(Inhibition Rate,IR%)的影响。并以48h的IR%为标准,选取分别达到约25%、50%以及75%的药物浓度作为流式细胞术(flow cytometry,FCM)及免疫细胞化学(SP法)的检测浓度。 4分组:设ATRA处理组(终浓度分别为0.78μmol/L、6.25μmol/L、12.5μmol/L)和ATRA联合γ射线处理组(0.78μmol/L+4Gy、6.25μmol/L+4Gy、12.5μmol/L+4Gy)以及正常对照组分别作用24h和48h,用FCM对TE13细胞进行凋亡率的检测以及周期分析、并检测CyclinD1、VEGF和E-cad三种蛋白表达的改变情况;SP法测各组CyclinD1、VEGF和E-cad表达变化情况。 5实验数据经SPSS13.0统计软件处理,采用重复测量设计方差分析,方差齐性检验、单因素方差分析,两两比较SNK-q检验以及直线相关性分析,P0.05为统计学上的显著性差异。 结果: 1在浓度为0.39μmol/L至12.5μmol/L浓度范围内,ATRA对TE13细胞的抑制作用呈现剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系。 2 TE13经ATRT及ATRT联合γ射线分别处理24h和48h,细胞增殖能力明显下降,更多的细胞被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡明显增加,其中以两者联合应用更为显著。 3 FCM检测结果表明,单用ATRA和联合γ射线分别作24h、48h,随剂量增大,CyclinD1、VEGF的平均荧光指数(FI)值递减,E-cad的FI值递增,且联合剂量和对应单药相比,效果更明显。 4各处理组作用于TE13细胞24h,FCM测FI值示,CyclinD 1和VEGF呈显著正相关(r=0.95,P0.05), CyclinD1和E-cad呈显著负相关(r=-0.885,P0.05), VEGF和E-cad呈显著负相(r=-0.918,P0.05)。 5各处理组作用于TE13细胞48h,FCM测FI值示,CyclinD1和VEGF呈显著正相关(r=0.972,P0.05), CyclinD和E-cad呈显著负相关(r=-0.953,P0.05), VEGF和E- cad呈显著负相关(r=-0.962,P0.05)。 6单用ATRA及ATRA联合60Coγ射线作用48h,SP法检测TE13细胞CyclinD1、VEGF和E-cad蛋白表达结果。结果示随剂量增大,CyclinD1、VEGF阳性细胞百分率递减,E-cad阳性细胞百分率递增,且联合剂量和对应单药相比,效果显著。相关性分析示,CyclinD1和VEGF呈显著正相关(r=0.752, P0.05), CyclinD1和E-cad呈显著负相关(r=-0.775, P0.05), VEGF和E–cad呈显著负相关(r=-0.738,P0.05)。 结论: 1 ATRA对TE13细胞具有明显的增殖抑制作用,呈现剂量以及时间依赖性。 2 ATRA能诱导TE13细胞凋亡并将其阻断于G0/G1期,呈剂量依赖性;联合γ射线,二者能协同抑制食管癌TE13细胞的恶性增殖并促使其凋亡。 3 ATRA能下调TE13细胞CyclinD1、VEGF蛋白表达,上调E-cad蛋白表达,且呈浓度依赖效应关系;ATRA联合γ射线应用能协同增强这一效应。 4 CyclinD1、VEGF表达呈正相关