慢性肾衰幼年大鼠肾小管上皮细胞转分化的分子表型及干预研究

作     者：李小琴 

作者单位：山西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：马宏

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

主      题：5/6肾切除幼年大鼠 肾小管上皮细胞转分化 α-平滑肌肌动蛋白 波形蛋白 E-钙黏蛋白 成纤维细胞特异性蛋白-1 肾小管间质纤维化 

摘      要：目的探讨5/6肾切除残肾慢性肾衰幼年大鼠慢性进展性肾小管间质损伤过程中,转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的表达趋势以及其介导的肾小管上皮细胞转分化(EMT)过程中相关蛋白成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的动态表达趋势,并观察给予血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素受体阻断剂(ARB)干预治疗的影响。 方法96只3周龄幼年雌性SD大鼠,随机将其分为假手术组(n=32)、5/6NX未干预组(n=32)和5/6NX干预组(n=32),采用5/6肾切除法制备残肾慢性肾衰模型,于手术完成后,经测定大鼠肾功能及肾脏病理以评价模型是否成功。5/6NX干预组于模型成功后给予ACEI+ARB联合灌胃。分别于第2、4、8、12周末,每组随机选8只大鼠,于内眦静脉采血测血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN);处死动物,取出肾组织,同时处死假手术组大鼠,取出肾组织;石蜡切片,HE染色观察肾小管间质损害及纤维化程度;免疫组化法检测肾小管上皮细胞TGF-β1、E-cadherin、FSP-1、α-SMA和vimentin等各目标蛋白质分子的表达。 结果 ⑴HE染色显示:假手术组大鼠肾组织无明显变化;5/6NX未干预组大鼠随着实验时间的延长,肾小管间质病变日趋明显,表现为组织中炎性细胞(主要为单核细胞)浸润,肾小管上皮细胞肿胀,肾小管塌陷及肾小管间隙加宽,并进行性形成纤维化病变;5/6NX干预组大鼠小管间质病变则相对减轻。 ⑵免疫组化染色半定量积分值显示:5/6NX未干预组和干预组大鼠肾小管上皮细胞E-cadherin的表达随着实验时间的延长而逐渐减少,各时间点与假手术组比差异具有统计学意义(P0.05),第8与12周,干预组蛋白表达量与未干预组比差异具有统计学意义(P0.05);而FSP-1、vimentin的表达逐渐增加,均较同期假手术组有显著差异(P0.05),除第2周外,各时间点干预组蛋白表达量与未干预组比差异具有统计学意义(P0.05);同时,α-SMA的表达量也逐渐增加,除第2周外,各时间点5/6NX未干预组和干预组α-SMA与假手术组比差异具有统计学意义(P0.05),第8与12周干预组蛋白表达量与未干预组比差异具有统计学意义(P0.05);TGF-β1的表达量逐渐增加,除第2周外,各时间点5/6NX未干预组和干预组TGF-β1蛋白的表达量与假手术组比差异具有统计学意义(P0.05),除第2周外,干预组蛋白表达量与未干预组比差异具有统计学意义(P0.05)。 结论5/6肾切除残肾慢性肾衰幼年大鼠在其肾损伤过程中前致纤维化因子TGF-β1表达呈逐渐上调趋势,其介导的肾小管上皮细胞转分化(EMT)相关标志蛋白FSP-1、α-SMA和vimentin的表达同步上调,而E-cadherin的表达呈下降趋势,给予ACEI和ARB干预后可逆转这些相关蛋白分子的表达趋势。