玉红膏对大鼠创面愈合过程中整合素β1、转录因子p63影响的实验研究

作     者：孔繁飞 

作者单位：中国中医科学院 

学位级别：硕士

导师姓名：孔焕宇

授予年度：2007年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：玉红膏 创面愈合 整合素β1 转录因子p63 

摘      要：目的利用大鼠全层皮肤缺损模型，评价玉红膏的疗效，研究其对整合素β、转录因子p63的影响，探讨玉红膏促进创面愈合的作用机理。 方法采用剪去全皮的方法在大鼠背部造成3个直径为1.8cm的圆形全层皮肤缺损动物模型，108只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组，玉红膏组、京万红(阳性对照)组、模型组，每组36只动物，另设正常组6只。玉红膏组造模后立即外敷玉红膏，每个创面0.1g：京万红组每个创面外敷京万红0.1g，2组均每日定时换药2次至创面愈合，于造模后第1、3、5、7、14、21天6个时间点观察记录创面的愈合情况及愈合时间、测量创面直径;制备组织切片进行HE染色和整合素β、转录因子p63的免疫组化染色。分别进行创面愈合率的计算并用光学显微镜观察皮肤再生情况;在20倍物镜下观察免疫组化染色结果，利用Image-Pro-Plus图像分析软件对整合素β进行OD值分析，对转录因子p63进行阳性细胞率统计。所有计量数据以x±s表示，采用SPSS13.0统计软件对服从正态分布的组间计量资料进行单因素方差分析。 结果①大体观察：在创伤后的早期，即造模后第1天，第3天，玉红膏组创面渗出物较多且浓稠，而京万红组和模型组渗出物较少且稀薄;愈合过程中肉芽组织生长和再上皮化情况玉红膏组和京万红组无明显差别，均优于模型组。②玉红膏组、京万红组和模型组的创面愈合时间分别为(13.5±0.9)d、(12.6±0.9)d和(19.1±2.6)d，玉红膏组和京万红组的创面愈合时间较模型组明显缩短，在同一时间点内玉红膏组和京万红组的创面愈合率均高于模型组，(P0.05)。③HE染色结果显示，炎症期的炎细胞浸润、增生期的肉芽组织增生、重塑期的胶原排列情况玉红膏组和京万红组无明显差别，均优于模型组。按照组织病理学评分标准，指标胶原纤维束的评价结果：玉红膏组和京万红组均明显优于模型组(P0.01)，说明玉红膏有改善创面愈合质量的作用。④整合素β免疫组化染色图像分析结果：从造模第1天起整合素βOD值开始有明显的增加，在第1天、第3天、第5天、第7天、第14天5个时间点玉红膏组、京万红组、模型组与正常组比较差异均有统计学意义(P0.05)，直至创面完全愈合的第21天3组OD值才与正常组无差别(P0.05);玉红膏组、京万红组均是在第7天达到OD值的峰值，而模型组则延迟至第14天;玉红膏组和京万红组进行比较，在创伤后的第7天和第14天2个时间点玉红膏组的OD值明显高于京万红组(P0.05)。⑤转录因子p63免疫组化染色图像分析结果：创伤后各时间点创伤皮肤表皮层的转录因子p63的阳性细胞数均高于正常组(P0.05);在造模后第1天京万红组与模型组差别不明显，而玉红膏组与模型组比较有统计学意义(P0.05);玉红膏组、京万红组均是在第7天达到峰值，而模型组则延迟至第14天;至创面完全愈合的第21天，玉红膏组、京万红组与正常组仍有统计学差异(P0.05)。⑥免疫组化染色显示整合素β、转录因子p63在组织中的表达定位：在正常皮肤，整合素β阳性细胞零星分布于表皮基底层，毛囊的外根鞘部：转录因子p63阳性细胞广泛分布于表皮基底层和毛囊及皮脂腺的上皮层。但在创伤皮肤，从伤后第1天开始，随着时间的推移，整合素β阳性细胞的定位分布不仅在上述组织结构中，在表皮层阳性细胞的分布由正常皮肤那样零星于表皮基底层，逐渐增加为基底层以及以上的几层，特征性的改变是棘层或颗粒层出现多个散在的阳性细胞，且越接近创面这些阳性细胞更加密集;其数量随着创面的缩小逐渐增加再减少，至创面愈合、完全上皮化，这些阳性细胞仍然存在。转录因子p63阳性细胞在表皮层的分布由在基底层的单层分布变为棘层和颗粒层也有分布，且越接近创缘阳性细胞数越多，在数量上也是随着时间的推移逐渐增多再减少的过程，至创面完全愈合。这些阳性细胞在表皮层的分布也是在基底层及以上的2～3层。光镜下，2个指标模型组在阳性细胞的数量及着色强度上均明显逊于玉红膏组和京万红组。 讨论由于整合素β在信号转导中有重要作用，推测玉红膏和京万红通过影响细胞间信号传递来促进创面愈合;另外整合素β还是表皮干细胞和短暂增殖细胞的标志物，玉红膏组与模型组的OD值比较差异明显(P0.05)，推测玉红膏有促进表皮干细胞增殖分化的作用。由于转录因子p63在增殖能力强的细胞中表达，因此统计分析结果表明玉红膏组表皮层细胞具有更强的增殖能力，提示玉红膏有促进细胞增殖的作用。 结论①玉红膏具有促进皮肤创面愈合的能力，能够提高愈合速度，改善愈合质量。②玉红膏促进创面愈合的机理可能与整合素β、转录因子p63的表达上调有关。