美洛昔康对人鼻咽癌CNE-1细胞株作用的研究

作     者：周芝芳 

作者单位：南华大学 

学位级别：硕士

导师姓名：沈宝茗

授予年度：2010年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：美洛昔康 CNE-1细胞 生长抑制 诱导凋亡 

摘      要：目的初步探讨选择性环氧酶-2(COX-2)抑制剂美洛昔康(Meloxicam)对培养的人鼻咽癌CNE-1细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制,分析COX-2抑制剂在鼻咽癌化学预防和治疗中的应用价值,为今后的动物和临床研究提供可靠的实验依据。 方法选择CNE-1细胞为研究对象,以不同溶度(0、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L)美洛昔康处理CNE-1细胞不同时间(24h、48h、72h )后,用MTT法观察不同溶度、不同时间美洛昔康作用下CNE-1细胞的生长变化;将所选择药物作用于CNE-1细胞后,用AO+EB染色法、流式细胞仪检测法测定美洛昔康不同溶度作用下不同时间后细胞的凋亡情况;采用细胞免疫荧光法检测对照组和不同溶度美洛昔康作用48h后,CNE-1细胞内COX-2蛋白的表达情况。 结果 ***比色法结果显示:美洛昔康对CNE-1细胞生长有显著的抑制作用,并且呈现出时间和剂量依赖性;随药物浓度加大和作用时间延长,存活细胞数量逐渐减少,在高溶度400umol/L时,48h后细胞生长抑制率高达50.3%;100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L美洛昔康作用CNE-1细胞24h,其抑制率分别为8.4 %、10.3 %、16.4%;100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L美洛昔康作用CNE-1细胞48h,其抑制率分别为10.4 %、28.8 %、50.3%;***+EB染色法及流式细胞检测法结果显示:用不同浓度的美洛昔康处理CNE-1细胞后,CNE-1细胞的凋亡率实验组与对照组相比均表现为不同程度的诱导作用(P0.05),并且这种诱导作用呈明显的剂量-时间依赖性。AO+EB染色结果可见明显的凋亡细胞存在,凋亡细胞数在高浓度美洛昔康组明显增多,400μmol/L溶度组干预48h后,200个细胞凋亡细胞达35±3个,流式细胞仪检查结果400μmol/L溶度组处理48h后细胞凋亡率为21.84±0.6%,与对照组有显著性差异(p0.05);3.细胞免疫荧光结果显示:CNE-1细胞中COX-2蛋白表达呈阳性率高,美洛昔康作用后, CNE-1细胞中COX-2蛋白阳性的表达受到抑制,美洛昔康浓度越高,其抑制COX-2表达的作用越明显, 100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L美洛昔康作用CNE-1细胞48h后,细胞内COX-2蛋白阳性表达率分别为39.61±0.34%、30.82±0.67%、23.03±1.12%,与对照组66.16±1.22%的阳性表达率有显著性差异(p0.05)。 结论 1.美洛昔康具有抑制CNE-1细胞增殖及诱导CNE-1细胞凋亡的作用,其抑制和诱导作用呈一定程度时间及剂量依赖性。 2.美洛昔康能抑制CNE-1细胞COX-2表达,其抑制作用呈时间依赖性。