miR-219-2-3p在胃癌中的作用及其DNA甲基化调控

作     者：雷荟仔 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李昱

授予年度：2013年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：miRNA DNA甲基化 胃癌 Erk1/2 

摘      要：目的： 胃癌人类是最常见的消化道恶性肿瘤。尽管治疗方法在不断的的改进，胃癌的发生机制仍然并不清楚。在我们的前期研究中，采用甲基化芯片筛选出14个RNA的启动子区域有甲基化信号的microRNA，miR-219-2-3p是其中一个。本实验拟进一步研究筛查出的miR-219-2-3p的功能及其甲基化调控。 方法： 我们首先采用实时定量PCR的方法研究miR-219-2-3p在113例胃癌组织和相应的癌旁对照组织中的表达情况，并在体外过表达miR-219-2-3p后检测其对细胞增殖，凋亡，迁移和侵袭的生物学影响。由于miRNA启动子区CpG岛甲基化沉默是肿瘤发生的重要机制之一，所以我们用5-杂氮-2’-脱氧胞苷和曲古霉素A处理胃癌细胞，并用RT-PCR检测miR-219-2-3p的表达情况。接下来，我们在22例胃癌组织和相应癌旁正常组织中采用甲基化特异性PCR的方法对miR-219-2-3p上游CpG岛的甲基化状态进行了分析。 结果： 我们发现与癌旁对照相比，miR-219-2-3p在胃癌组织和胃癌细胞系中表达呈明显下降趋势，而且miR-219-2-3p的表达水平随着肿瘤分期的增加而降低。同时，使用miRNA的模拟物在胃癌细胞系MGC-803和HGC-27中过表达miR-219-2-3p后,发现抑制了胃癌细胞的增殖,侵袭和迁移能力，促进了细胞的凋亡，降低了p-ERK1/2的表达水平。此外，经过5-杂氮-2’-脱氧胞苷和曲古霉素A处理后的胃癌细胞，miR-219-2-3p的表达明显升高（2倍），甲基化特异性PCR显示在miR-219-2-3p的可能的启动子区域，癌和癌旁组织都能检测到DNA甲基化。然而，在miR-219-2-3p表达下调组DNA甲基化水平比miR-219-2-3p表达上调组更高。 结论： 上述实验结果提示miR-219-2-3p通过调节ERK1/2相关的信号转导通路，参与胃癌的发生发展，这为胃癌的治疗提供了一种新的治疗策略。