环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398对人肝癌BEL-7402和HepG2细胞凋亡及凋亡抑制蛋白表达的影响

作     者：付卫争 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：孙国平

授予年度：2010年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：NS-398 环氧合酶-2 细胞凋亡 凋亡抑制蛋白 原发性肝癌 

摘      要：背景原发性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一,其发病率为30.3/10万,占所有癌症的5%。近二十年来,我国HCC死亡率增加了41.7%,约占全世界HCC死亡人数的45%。外科手术是目前最有效的治疗方法,但是超过80%的肝癌病例被确诊时已经是晚期,失去了手术机会,而即使对于那些手术患者,其两年内的复发率也高达50%。全身性化疗是治疗肝癌尤其是无手术指征的晚期肝癌的重要方法,但对肝癌的疗效尚令人失望。凋亡抵抗是HCC的特征之一,在HCC的发生发展中占有重要地位。凋亡抵抗也是肝癌治疗失败的重要原因。最近的研究发现环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)有明显的抑制凋亡作用,COX-2在肝癌等多种肿瘤中存在着高表达,其在肝细胞癌发生过程中起重要作用,COX-2抑制凋亡的作用被认为在HCC化疗抵抗中发挥着重要作用。COX-2选择性抑制剂可抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡,但其诱导细胞凋亡的详细机制尚不十分清楚。 目的探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂NS-398对人肝癌BEL-7402、HepG2细胞凋亡及凋亡抑制蛋白survivin、XIAP和c-IAP1表达的影响。 方法采用MTT法测定COX-2选择性抑制剂NS-398对BEL-7402、HepG2细胞的增殖抑制情况;原位细胞凋亡检测法(Terminal deoxynucleotidy transferase-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞仪(Flow Cytomtry, FCM)检测凋亡率;免疫细胞化学技术检测COX-2,survivin,XIAP和c-IAP1蛋白的表达情况并分析COX-2与survivin,XIAP,c-IAP1表达的相关性。 结果NS-398可以显著抑制BEL-7402和HepG2细胞的增殖,并随着剂量的增加和时间的延长,该抑制作用增强(P0.01);TUNEL染色可见典型的凋亡形态学特征,包括染色质凝集、边集化,呈新月形聚集于核膜下;流式细胞仪检测显示在G0/Gl期前出现一个代表凋亡细胞的亚G1峰,即凋亡峰,用药组凋亡率明显高于对照组,NS-398浓度为0、25、50、100和200μmol/L时,BEL-7402凋亡率分别为(1.41±0.23)%、(6.69±0.57)%、(10.96±1.35)%、(22.83±1.84)%和(32.25±2.41)%;HepG2凋亡率分别为(3.3±0.6)%、(5.7±1.8)%、(14.2±1.3)%、(40.1±2.3)%和(64.9±5.8)%(P0.01)。免疫细胞化学分析显示,与对照组相比,NS-398作用后可使COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达明显下调(P0.01)。相关性分析显示在肝癌细胞中COX-2与survivin,XIAP,c-IAP1的表达呈显著正相关(P0.01)。 结论NS-398对人肝癌细胞株BEL-7402、HepG2有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其机制可能与通过下调survivin,XIAP和c-IAP1的表达有关。