松油烯4醇体内外抑制人非小细胞肺癌增殖及机制研究

作     者：潘乾广 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：叶秀峰

授予年度：2014年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：松油烯4醇 A549 凋亡 自噬 

摘      要：目的：探讨松油烯4醇体内外对人非小细胞肺癌A549增殖抑制作用及其可能作用机制。 方法：不同浓度松油烯4醇作用于人肺癌细胞A549后，应用MTT法检测细胞增殖抑制率及IC50;CCK8比色分析法绘制细胞生长曲线观察增殖抑制的时间效应;透射电镜观察药物作用前后细胞超微结构的变化;流式细胞技术检测细胞周期、凋亡、细胞内钙离子浓度变化;将A549细胞移植瘤裸鼠分为对照、低剂量、高剂量组药物连续腹腔注射十天后分别测量各组移植瘤的平均体积和重量，观察药物的体内抑制肿瘤生长作用;运用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测自噬相关基因BECN1和LC3以及凋亡相关基因BCL-2和Caspase-3的表达变化情况。 结果：A549细胞经不同浓度（空白对照、0.02%、0.04%、0.06%、0.08%、0.1%v/v）松油烯4醇作用24h后，IC50为0.067%v/v。CCK-8实验结果表明给药组细胞生长曲线明显较对照组平缓，并与给药剂量呈显著相关性。透射电镜观察可见经松油烯4醇处理的A549细胞内自噬泡数量明显增加。FCM检测结果显示，经松油烯4醇处理的A549细胞周期被阻滞在S期，细胞凋亡率升高,各药物干预组细胞内钙离子荧光强度均明显高于对照组（P0.05）。实验组移植瘤平均瘤体积和平均瘤质量均低于对照组，比较差异均有统计学意义(P0.05)，计算高、低剂量的松油烯4醇对肺癌裸鼠移植瘤生长抑制率分别为77.46%和53.33%。实时荧光定量PCR及Western blot结果显示体外培养细胞及裸鼠移植瘤组织中的自噬相关基因BECN1和LC3蛋白及mRNA表达量上调，凋亡相关基因中Caspase-3蛋白及mRNA表达量上调BCL-2蛋白及mRNA表达量下调（P0.05）。 结论：松油烯4醇对人非小细胞肺癌A549细胞具有抑制增殖作用，该作用可能与其诱导自噬和凋亡有关。