氟哌啶醇与新型人重组肿瘤坏死因子逆转肿瘤细胞耐药机制的研究

作     者：周京红 

作者单位：中国人民解放军军事医学科学院 

学位级别：硕士

导师姓名：吴德政

授予年度：2003年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：氟哌啶醇 重组人肿瘤坏死因子 多药耐药 K562/Dox MCF-7/Dox 氯离子通道 

摘      要：本文研究的目的是为了在临床应用的药理活性物质中探寻逆转肿瘤耐药性的新药。重点研究了氟哌啶醇(Haloperidol，Hal)及新型人重组肿瘤坏死因子rhTNF-NC对人红白血病耐阿霉素(Doxorubicin，Dox)细胞株K562／Dox及人乳癌耐阿霉素细胞株MCF—7／Dox多药耐药性(Multidrug resistance，MDR)的逆转及其机制。此外，还观察了中药提取物ZYY-6、新合成药LY980503的逆转作用及其机制。 应用MTT法及乳酸脱氢酶(LDH)法测定了细胞对0-20umol／L阿霉素(Dox)的敏感性。RT-PCR法分析Hal、rhTNF-NC、ZYY-6处理后MDR1、MRP和GST π，TopoⅡαmRNA表达的变化。通过流式细胞术观察0、6.25、12.5、25umol／L Hal对细胞内Dox蓄积和细胞周期进程的影响，同时也观察了rhTNF-NC对细胞内Dox蓄积的影响。应用MOAE荧光染料探针荷载细胞，通过日立F4500荧光分光光度计测定细胞荧光强度来检验Hal及rhTNF-NC对瘤细胞体积激活的氯离子通道的影响。应用Fura2／AM荧光探针染料(用于单层贴壁细胞MCF-7／Dox)及库尔特频道测定仪(用于悬浮细胞K562／Dox)测定了低渗环境下细胞的体积调节功能(Regulatory volume decrease，RVD)。此外，还观察了反义PKC。基因转染了耐药细胞后氯离子通道及细胞体积的变化。 氟呱陡醇和新型人重组肿瘤坏死因子逆转肿瘤耐药机理的研究 第一部分实验证明Hai对K562/Dox的耐药性具有明显的逆转作用。在1 2.5、 6.25及3.125umol/L时的逆转倍数分别为9.06、4.33及2.19。rh1NF一NC在500及 500OLI/mL时也可逆转K562/Dox细胞对Dox的耐药性2.51与5.33倍。当Hal3.125 umol/L及rhTNF一NC500u/mL联合应用时逆转作用可以相加，其逆转倍数在 K562/Dox细胞可由单用时的2.19及2.51倍，增加到5.01倍;在MCF一7/DOX细 胞中Hal和rh1NF一NC也表现出逆转耐药的作用，并且由两药单用时的2 .28及2 .18 倍增至合用时的5.27倍。量一效曲线分析表明Hal及th1NF一NC可将耐药细胞的 Dox浓度一效应曲线平行上移，与单用Dox比较P0.01。 第二部分实验应用***/L Hal处理耐药细胞K562/Dox3天后，其MDRI 及M对的mRNA表达水平均呈现时间依赖性明显降低，分别较原水平下降76.29% 及64.63%。GST，mRNA表达于药后d2下降66.06%，于d3回升。rhTNF一NC也表 现相似的对MDRI，MRP及GST:mRNA的抑制作用，2500川mLthTNF处理 K562/Dox细胞3天后MDRI、MRP、GST:可分别下降59.52%、65.52%及57.93%， rhTNF一NC还可使Topoll。基因由0.37士0.11升高077士0.07。当6.25umo比Hal与 1000侧mL rhTNF一NC合用时，对MDRI的抑制作用呈现明显相加，由单用时的抑 制率31.3%及33.17%升高为62.03%。ZYY一6也表现相似的抑制作用。FCM的 检测结果表明Hal处理细胞th后，Dox在K562/Dox细胞内的蓄积量(以荧光强度 表示)明显增加，并呈浓度依赖性。单用1.25或sumol/L Dox时的荧光强度分别 为6 .67士1.31和20，12士5.67。当6，25、12.5或25 umol/L Hal与1‘25 umol/L的Dox 合用时，荧光值可分别增加至10.01士2.05、一3.33士2.43及17.44士2.69，与5 umol/L Dox合用时可分别增加至23.87士5.05、26.19士7.35和30.33士6.81。thTNF一C也表 现类似的增加细胞内Dox蓄积的作用。5000u/m L th1NF一NC可使5 umol/L Dox引 导的K562/Dox细胞的凋亡率由3.78士0.56%增加到6.89士0.12%(与单用Dox比 较p0.05)。此外，还发现Hal可明显增强Dox对K562/Dox细胞的GZ/M阻滞作 用，而且这一增强作用呈现明显的量一效关系。3.125、12.5和25LImol/L Hal可使阻 断在GZ/M期的细胞由单用sumol几Dox时的9.9士4.3%，上升至合用时的16.3士 5.5%、23.4士3.0%及37.6士7.0%与单用时比较P0.01。 氟呱咙醇和新型人重组肿瘤坏死因子逆转肿瘤耐药机理的研究 第三部分:逆转耐药的药物影响P一gP的研究