IL-1β和TNF-α对大鼠平滑肌细胞内皮脂肪酶表达水平的影响及阿托伐他汀的干预作用

作     者：成丽英 

作者单位：山西医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：肖传实

授予年度：2008年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：内皮脂肪酶 大鼠主动脉平滑肌细胞 IL-1β TNF-α 阿托伐他汀 

摘      要：一、IL-1β及TNF-α对大鼠主动脉平滑肌细胞(RASMC)内皮脂肪酶表达水平的影响 目的:观察IL-1β及TNF-α对RASMC EL表达的影响。 方法:采用贴块法原代培养RASMC,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,通过α-肌动蛋白免疫荧光法对培养细胞进行鉴定。选用第3-5代细胞进行实验,研究对象随机分为三组:⑴空白对照组(不加干预措施原培养液继续培养);⑵IL-1β干预组:①不同浓度IL-1β干预组:分别以终浓度为1、5、10、20、30ng/mL的IL-1β与RASMC作用24小时;②不同时间IL-1β干预组:终浓度为30ng/mL的IL-1β与RASMC分别作用1、6、12、18、24、48、72小时;⑶TNF-α干预组:①不同浓度TNF-α干预组:分别以终浓度为5、10、15、20、50ng/mL与RASMC作用24小时;②不同时间TNF-α干预组:终浓度为50ng/mL的TNF-α与RASMC分别作用1、6、12、18、24、48、72小时。用ELISA与RT-PCR方法分别检测RASMC的EL蛋白及mRNA表达水平。 结果: 1.细胞鉴定:荧光显微镜下可见细胞胞浆内均呈现绿色荧光,即胞浆内表达α-肌动蛋白,符合平滑肌细胞特征。 2.上清液LDH活性检测结果显示,IL-1β50ng/mL组(102.31±2.35)和TNF-α100ng/mL组(134.56±1.78)显著高于空白对照组(70.17±2.13)(P0.05)。说明50ng/mL IL-1β和100ng/mL TNF-α对细胞有毒性作用。在接下来的实验中排除这两个浓度值。 ***-1β及TNF-α对RASMC EL蛋白表达水平的影响 ⑴不同浓度IL-1β及TNF-α对RASMC EL蛋白表达水平的影响: ①RASMC经不同浓度IL-1β诱导24小时后,EL蛋白表达水平分别为39.67±1.71、61.82±3.59、83.84±2.97、105.70±1.59、114.77±1.17ng/mL,与对照组34.17±1.73 ng/mL比较差异有统计学意义(P0.05),各浓度组间比较差异亦有统计学意义(P0.05)。EL蛋白表达水平随IL-1β浓度的增加呈上升趋势(较对照组分别增加了16.10%、80.92%、145.36%、209.34%、235.88%),发现在5～20ng/mL之间EL蛋白表达水平显著升高,之后缓慢上升,至30ng/mL达最高浓度值。 ②RASMC经不同浓度TNF-α诱导24小时后,EL蛋白表达水平分别为39.63±1.10、61.49±1.90、76.36±2.15、93.63±1.52、104.31±2.33ng/mL,与对照组34.17±1.73 ng/mL比较差异有统计学意义(P0.05),各浓度组间比较差异亦有统计学意义(P0.05)。EL蛋白表达水平随TNF-α浓度的增加呈上升趋势(较对照组分别增加了15.98%、79.95%、123.47%、174.01%、205.27%),发现在10～20ng/mL之间EL蛋白表达水平显著升高,之后缓慢上升,至50ng/mL达最高浓度值。 ⑵IL-1β及TNF-α对RASMC作用不同时间后EL蛋白表达水平的影响: ①RASMC经终浓度为30ng/mL IL-1β诱导不同时间后,EL蛋白表达水平分别为37.46±1.40、47.17±1.11、57.12±1.70、88.74±1.74、114.77±1.17、119.69±1.35、125.18±1.13ng/mL,各时间组间比较差异有统计学意义(P0.05)。EL蛋白表达水平随时间延长呈上升趋势(分别较前一个时间点增加了25.92%、21.09%、21.20%、55.36%、29.33%、4.29%、4.59%)。发现在12～24h之间EL蛋白表达水平升高显著,之后缓慢上升,至72h达最高浓度值。 ②RASMC经终浓度为50ng/mL TNF-α诱导不同时间后,EL蛋白表达水平分别为37.46±1.40、47.17±1.11、53.97±1.08、80.90±1.06、104.31±2.33、116.34±0.84、125.51±1.73ng/mL,各时间组间比较差异有统计学意义(P0.05)。EL蛋白表达水平随时间延长呈上升趋势(分别较前一个时间点增加了25.92%、21.09%、21.20%、55.36%、29.33%、4.29%、4.59%)。发现在12～24h之间EL蛋白表达水平升高显著,之后缓慢上升,至72h达最高浓度值。 4. IL-1β及TNF-α对RASMC ELmRNA水平的影响 ⑴不同浓度IL-1β及TNF-α对RASMC E