E-选择素在急性肺损伤新生大鼠肺组织的表达及其意义

作     者：郝金斗 

作者单位：广州医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：周晓光

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

主      题：急性肺损伤 内皮细胞 E-选择素 大鼠,新生 

摘      要：目的: 急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)是常见的临床危重症,可以发生在各个年龄阶段。目前在新生儿ALI/ARDS的诊断中尚缺乏可行的实验室诊断指标。肺血管内皮细胞(PVEC)是ALI/ARDS发生时受损的主要靶细胞,它的活化可以作为ALI/ARDS的重要标志。内皮细胞(EC)的活化可使白细胞黏附、迁移,是导致ALI/ARDS发病的重要步骤,而这一过程与黏附分子的表达密切相关。E-选择素是唯一限于活化的EC表面表达的一种黏附分子,是反映EC活化的一个很好的标志物。本研究采用脂多糖(LPS)腹腔注射制备新生大鼠ALI/ARDS模型,动态观察肺组织血管内皮细胞E-选择素表达及血清中sE-选择素水平的变化规律,探讨E-选择素在新生儿ALI早期诊断中的作用与意义。 方法: 将90只日龄6～7天的新生大鼠随机分为对照组和ALI组,对照组10只,ALI组80只;ALI组又根据处死的时间点不同分成8个亚组,即0.5h组、1h组、2h组、3h组、4h组、8h组、12h组、24h组,每个亚组各10只。ALI组给予LPS 4mg/kg腹腔注射;对照组腹腔注射等体积的生理盐水。分别采用免疫组化(SABC法)和酶标记免疫吸附测定法(ELISA)对两组大鼠肺组织E-选择素表达和血清sE-选择素水平进行动态观察,对肺组织湿/干重(W/D)及其病理学改变也进行观察和分析。 结果: 1.大鼠肺组织肉眼观察对照组肺组织外观呈淡粉肉色,外表光滑,弹性良好;ALI组在腹腔注射LPS后,各亚组均有不同程度的充血和水肿;其中1h组可见部分肺脏针尖样肺出血;3-8h组出血程度由局灶性到弥漫性逐渐加重,24h呈现明显弥漫性肺出血。 2.光学显微镜观察对照组大鼠肺泡结构清晰,肺泡、间质、肺血管及支气管结构均正常。ALI组在腹腔注射LPS后1小时可见肺泡壁增厚,肺间质水肿,肺泡腔变窄,肺泡毛细血管充血,高倍镜下可见血管内皮细胞水肿,4小时后可见内皮细胞脱落。肺泡间质有白细胞浸润,以中性粒细胞为主,8小时可见部分肺组织肺泡内出血。 3.大鼠肺组织W/D比值ALI组与对照组比较,0.5～3h各时间点肺组织W/D比值无统计学差异(P0.05),4～12小时ALI组与对照组比较肺组织W/D比值有显著性升高(P0.05);腹腔注射LPS后24小时模型组与对照组肺组织W/D比值基本接近,无统计学差异。ALI组新生大鼠紫腹腔注射LPS后1小时即开始升高,8小时达到高峰,之后开始回落,24小时ALI组接近对照组。 4.血清sE-选择素水平的动态变化与对照组比较新生大鼠腹腔注射LPS后2～4小时血清sE-选择素水平具有显著性差异。新生大鼠腹腔注射LPS1小时后,血清中的E-选择素逐渐升高,以第2小时血清水平最高,用药后2～4小时具有显著性差异(P0.05),第8小时开始下降,24小时与对照组无显著性差异。各组间具有显著性差异(P0.01)。 5.肺组织E-选择素的表达:对照组血管内皮细胞E-选择素基本不表达,ALI组血管内皮细胞表达明显增加,呈棕黄色或黄色,小动脉、小静脉内皮细胞以及毛细血管均有表达。ALI组E-选择素表达具有明显的时序性,腹腔注射LPS 2小时开始表达,4小时表达最多,2-4小时与对照组比较具有显著性差异(P0.01),8小时表达下降。 6.肺组织E-选择素表达与血清sE-选择素的相关性分析肺组织E-选择素表达与血清sE-选择素水平具有直线相关性,两者呈显著正相关(r=0.730,P0.01)。 结论: 1.给予新生大鼠腹腔注射4mg/kg LPS可成功制备ALI/ARDS动物模型。 2.新生大鼠发生ALI时,肺部活化的血管内皮细胞表达E-选择素增加,E-选择素的表达具有明显时序性。肺组织E-选择素的表达明显早于肺水肿的发生,提示E-选择素可以早期反映ALI肺血管内皮细胞的活化。 3.肺组织E-选择素表达与血清sE-选择素水平在新生大鼠ALI早期(8h)均明显升高,而且二者成正相关关系,表明血清sE-选择素水平可以早期反映ALI血管内皮损伤,血清sE-选择素浓度可作为ALI早期诊断的实验室指标。