H7亚型禽流感病毒核酸标准品制备及双探针荧光RT-PCR检测研究

作     者：高志强 张鹤晓 蒲静 张伟 谷强 乔彩霞 张利峰 汪琳 

作者机构：北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心北京通州101113 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2014年第50卷第11期

页      面：13-15,18页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：质检公益性行业科研专项(201010067 201310253) 

主　　题：禽流感病毒 H7亚型 标准品 荧光RT-PCR 

摘      要：从禽流感病毒A/Chicken/1/2002(H7N1)核酸中扩增了完整HA的基因编码序列,克隆测序后,采用体外转录方法制备c RNA。用RNA保存液稀释至含量约108Copies/μL。分装后进行均匀性和稳定性检验,通过8家实验室联合定值,取平均值作为定值结果;经统计分析计算了该标准品的不确定度。此外,采用Taq Man方法,根据禽流感病毒H7亚型的血凝素基因的末端,采用1对引物和2条MGB探针,建立了禽流感病毒H7亚型Taq Man荧光RT-PCR快速检测技术。应用建立的方法对研制的标准品进行检测,检测限可达10基因拷贝;对新城疫病毒及其他亚型的流感病毒核酸进行检测,结果表明,建立的方法特异性良好,而且双探针的设计思路更能保证病毒核酸的有效检测,防止漏检。