免疫磁珠分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit^+lin^-

作     者：张春兴 廖彩仙 张守华 苏俊 周杰 朱槿 肖菊花 Zhang CX;Liao CX;Zhang SH;Su J;Zhou J;Zhu J;Xiao JH

作者机构：南方医科大学南方医院肝胆外科广东省广州市510515 宿迁市中心血站江苏省宿迁市223800 南昌大学医学院第一附属医院超声科江西省南昌市330006 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2007年第11卷第7期

页      面：1232-1234页

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 0403[教育学-体育学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 0703[理学-化学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30371385) 广东省自然科学基金(04020419)~~ 

主　　题：骨髓 肝细胞,代谢 干细胞 免疫磁珠 

摘      要：目的:利用免疫磁性细胞分选系统分离纯化骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-。方法:实验于2006-07/08在南方医科大学实验动物中心完成。6～8周龄的SPF级纯系BALB/C雄性小鼠10只,体质量18～20g。收集小鼠股骨骨髓细胞,利用免疫磁性细胞分选系统,通过两步法分选纯化c-Kit+lin-:将获取的lin-细胞悬液8℃条件下1500r/min离心10min,弃上清,按80μL/107加入Buffer重悬细胞。按20μL/107加生物素抗体磁珠,混匀,4℃冰箱孵育15min,按1mL/107加入Buffer洗细胞1次,8℃条件下1500r/min离心10min,弃上清,按500μL/108加入Buffer重悬细胞。Buffer500μL润MS柱,悬液过柱后,Buffer500μL/次洗柱3次,柱子脱离磁场,加1mLBuffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit+lin-细胞,收集到c-kit+lin-细胞,细胞计数。取2.0×106个细胞分成10等份,流式细胞仪分析c-Kit+lin-细胞纯度,计算回收率,评估纯化效率,苔盼兰染色检测纯化前后的细胞活力。计算活细胞的百分率。细胞纯度和细胞回收率的计算:细胞纯度=分离产物中的阳性细胞数/分离细胞的总细胞数×100%,细胞回收率=分离产物中的阳性细胞数/起始标本阳性细胞总数×100%。结果:10只小鼠均进入结果分析。利用免疫磁性细胞分选系统分选出的骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-细胞纯度和回收率分别为(77.98±2.34)%,75.40%,纯化前后细胞活力不受影响。结论:免疫磁性细胞分选系统能有效分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-,纯度和回收率高,且不影响细胞活力。