检测水痘-带状疱疹病毒糖蛋白水平双抗体夹心ELISA法的建立和验证

作     者：朱琨莹 郭世杰 袁若森 潘东 张春 陈晓旭 衣延明 杨阳 郑柏松 姜春来 ZHU Kunying;GUO Shijie;YUAN Ruosen;PAN Dong;ZHANG Chun;CHEN Xiaoxu;YI Yanming;YANG Yang;ZHENG Baisong;JIANG Chunlai

作者机构：吉林大学第一医院艾滋病与病毒研究所吉林长春130021 吉林大学第一医院新生儿科吉林长春130021 长春百克生物科技股份公司吉林长春130012 吉林大学生命科学学院微生物免疫系吉林长春130012 

出 版 物：《吉林大学学报（医学版）》 (Journal of Jilin University：Medicine Edition)

年 卷 期：2020年第46卷第6期

页      面：1315-1323页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：科技部国家科技重大专项基金资助课题(2018ZX10302104-001-010) 吉林省卫健委科研项目资助课题(20161J065) 吉林省分子病毒学重点实验室科研项目资助课题(20102209) 

主　　题：水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白 双抗体夹心 酶联免疫吸附试验 变异系数 

摘      要：目的:建立可快速检测水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白抗原水平的双抗体夹心ELISA法,并验证其特异性、线性、准确性和精密性。方法:采用抗VZV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测VZV糖蛋白抗原水平。优化抗体组合、抗体工作浓度、包被条件、封闭条件、酶标抗体反应条件和显色条件,并对建立的方法进行特异性、线性、准确性及精密性验证。结果:捕获抗体VZV-mAb-03和酶标抗体VZV-mAb-HRP-02的组合为最优双抗组合,其最适浓度分别为450.0和0.1μg·L^-1,最适包被条件为0.05 mol·L^-1 Tris-HCl(pH值为8.7±0.1)在4℃条件下包被过夜(18 h),最适封闭条件为1%牛血清白蛋白(BSA)在37℃条件下封闭2 h,最适样品稀释液为磷酸盐吐温缓冲液(PBST),抗原夹心与酶标抗体最适反应条件均为37℃、1 h,最适显色条件为37℃、15 min。经验证,该方法与其他人用疫苗及辅料成分无交叉反应;线性范围为500~2600 PFU·mL^-1,回归系数(R2)0.95;批内回收率82.2%~115.7%,变异系数(CV)10.2%;批间回收率80.5%~118.6%,板内CV17.4%,板间CV14.9%。结论:建立了一种基于检测双抗体夹心的VZV糖蛋白抗原水平的ELISA检测方法,符合定量检测需要,可用于VZV疫苗的研发和生产过程中的抗原水平检测。