猪传染性胃肠炎病毒纯化方法的选择与优化

作     者：蒋凤英 邹勇 何锡忠 李春华 张春玲 王英 许宝华 JIANG Feng-ying;ZOU Yong;HE Xi-zhong;LI Chun-hua;ZHANG Chun-ling;WANG Ying;XU Bao-hua

作者机构：上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 南昌大学医学院江西南昌330006 

出 版 物：《江西农业学报》 (Acta Agriculturae Jiangxi)

年 卷 期：2010年第22卷第8期

页      面：129-131页

学科分类：09[农学] 

基　　金：江西省自然科学基金项目(2007GZY1003) 

主　　题：猪传染性胃肠炎病毒 纯化方法 纯化病毒 包被抗原 ELISA试验 蛋白浓度 ELISA检测 饱和硫酸铵 优化参数 浓缩时间 聚乙二醇 经济实用 检测结果 蛋白含量 超速离心 TGEV PCR方法 阴阳性 细胞毒 上清液 

摘      要：利用超速离心、饱和硫酸铵、聚乙二醇-6000(PEG-6000)对猪传染性胃肠炎细胞毒进行纯化,收集纯化病毒测定蛋白含量,分别运用PCR方法和作为ELISA包被抗原方法对纯化的效果进行检测,并对最佳纯化方法进行优化。3种纯化方法获得的蛋白浓度分别为1.875、6.435、0.763 mg/mL。PCR检测结果显示PEG-6000纯化后在上清液中未检出病毒,其余2种上清中均检出病毒。3种纯化方法制备的包被抗原ELISA试验阴阳性比值(P/N)分别为2.21、1.27、2.25,最终选择PEG-6000作为纯化病毒的方法,其最佳优化参数为PEG-6000浓度8%、浓缩时间2 h、NaCl浓度1%。研究表明利用PEG-6000纯化TGEV是一种经济实用、操作简单、并有较高纯化效率的方法,纯化后的TGEV为后续建立特异、敏感、快速的ELISA检测方法奠定了良好基础。