SLT-Ⅱe对PIMVECs分泌炎症反应相关细胞因子的影响

作     者：王伟然 施晓杰 张蒙 穆祥 WANG Weiran;SHI Xiaojie;ZHANG Meng;MU Xiang

作者机构：北京农学院动物科学技术学院兽医学(中医药)北京市重点实验室北京102206 中央民族大学药学院北京100081 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第47卷第11期

页      面：3467-3473页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发专项资助项目(2017YFD0501501) 北京市生猪产业创新团队项目(BAIC02-2020) 

主　　题：志贺样毒素Ⅱ型变异体 小肠微血管内皮细胞 炎症反应细胞因子 猪 

摘      要：本试验旨在探究大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)处理后,猪小肠微血管内皮细胞(PIMVECs)分泌的肿瘤坏死因子α(TNF-ɑ)、P选择素(P-selectin)、一氧化氮(NO)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和内皮素(ET)水平的变化。采用超速离心法提取SLT-Ⅱe,采用BCA试剂盒测定其质量浓度,使用SDS-PAGE及Western blotting验证蛋白纯度;用WST-1法从0.1、0.5、1、5、10μg/mL SLT-Ⅱe和0、2、4、8、12、24 h中筛选出SLT-Ⅱe对PIMVECs最佳作用浓度与时间;ELISA法检测对照组(0μg/mL SLT-Ⅱe)和试验组(1μg/mL SLT-Ⅱe)细胞上清中TNF-ɑ、P-selectin、NO、ICAM-1和ET含量的变化。结果表明:所提蛋白为SLT-Ⅱe,蛋白含量为721.75μg/mL;1μg/mL的SLT-Ⅱe作用8 h后可极显著降低PIMVECs的活性(P0.01);1μg/mL的SLT-Ⅱe作用9和12 h时PIMVECs的TNF-ɑ分泌量显著升高(P0.05),NO/ET的值显著高于对照组(P0.05),作用6、9、12 h时P-selectin的含量显著升高(P0.05),作用12 h时的ICAM-1分泌量显著升高(P0.05)。综上所述,SLT-Ⅱe浓度为1μg/mL时可以诱导PIMVECs分泌的TNF-ɑ、P-selectin、ICAM-1以及NO/ET上升,为研究仔猪水肿病发病机制提供参考。