HL-60/IL-6体外热原检测方法学研究及对细胞治疗产品的适用性考查

作     者：王冲 徐琳 华晓东 Wang Chong;Xu Lin;Hua Xiaodong

作者机构：天津市药品检验研究院天津300070 

出 版 物：《天津药学》 (Tianjin Pharmacy)

年 卷 期：2020年第32卷第2期

页      面：6-10页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主　　题：HL-60 IL-6 热原检测 细胞治疗产品 

摘      要：目的:建立用于体外热原检测的HL-60/IL-6法,并对细胞治疗产品进行适用性考查。方法:以细菌内毒素为工具药物,对可能影响HL-60/IL-6法试验结果的不同细胞代次、孵育时间、细胞数量、显色时间及血清含量5种因素进行考查,优化最佳试验条件。选用人源间充质干细胞(MSC)、树突细胞(DC)、T淋巴细胞、嵌合抗原T细胞(CAR-T)治疗产品进行方法适用性研究。应用CD3-APC抗体及凋亡试剂盒检测T及CAR-T细胞对HL-60细胞的凋亡作用,更为直观地验证其干扰作用。结果:经优化的HL-60/IL-6法的试验条件为:10~25代细胞、共同孵育24 h、细胞数量为2×10^5个/孔,血清含量为2%。采用本法对细胞治疗产品进行检测,干扰试验的回收率均在50%~200%之间,热原物质检测结果均为未检出或阴性,与细菌内毒素动态显色方法结果均一致。流式细胞检测仪结果表明,与T及CAR-T细胞共同孵育24 h,对HL-60细胞无凋亡作用,不会对试验系统产生干扰。结论:HL-60/IL-6法检测敏感性高,结果重复性好,可应用于细胞治疗产品热原物质的检查。