人血清中cTnI的化学发光酶免疫分析研究──实验条件的优化

作     者：何农跃 郭会时 顾春荣 杨笛 张寄南 HE Nong-Yue;GUO Hui-Shi;GU Chun-Rong;YANG Di;ZHANG JI-Nan

作者机构：东南大学生物电子学国家重点实验室南京210096 南京医科大学第一临床医学院心血管病研究所南京210029 

出 版 物：《高等学校化学学报》 (Chemical Journal of Chinese Universities)

年 卷 期：2007年第28卷第2期

页      面：242-245页

核心收录：

学科分类：081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 070302[理学-分析化学] 0703[理学-化学] 

基　　金：国家自然科学基金(批准号:60571032 90606027和60121101) 江苏省高新技术项目(批准号:BG2003033) 高等学校博士学科点专项科研基金(批准号:20050286014)资助 

主　　题：化学发光免疫分析 急性心肌梗死 AMPPD 心肌肌钙蛋白(cTnI) 

摘      要：采用高效化学发光试剂3-（2＇-螺旋金刚烷）-4-甲氧基-4-（3＇-羟基）苯-1，2-二氧杂环丁烷磷酸（AMPPD）作为检测底物，并将传统的ELISA两步双抗夹心法改为一步法，得到了高灵敏测定人血清中心肌肌钙蛋白I（cTnI）的化学发光酶免疫分析优化条件．采用单因素变化法和方阵滴定法得到的最佳实验条件为：捕获抗体包被浓度为10．00μg/ml，以pH=7．0的PBS作为免疫反应缓冲底液，以含质量分数为1．0％的BSApH=9．6的碳酸盐溶液缓冲液，于4℃封闭过夜，生物素-检测抗体（Biotin—IsG2）以及碱性磷酸酶．亲和素（AIJP—Avidin）结合物均采用1：2000稀释度，免疫反应条件为37℃，孵育时间60min，以去离子水作为洗涤剂，以1：100稀释的AMPPD作为发光反应底物，发光反应时间10min（37℃）．检出限为0．02ng／mL，比现行ELISA法灵敏度提高一个数量级；测定周期约75min，比两步法ELISA快得多；线性范围（0．04-36．20ng／mL）比ELISA法扩宽了两个数量级；加标回收率97．5％-102．8％，对标准样品的测定结果与用ELISA法的测定结果吻合；重复性好，3个样品批内变异系数均小于8．5％（n=12）．