烟曲霉Aspergillus Fumigatus 3-甾酮-Δ~1-脱氢酶基因的克隆、异源表达和活性鉴定

作     者：陈苗苗 林良才 马昱澍 王风清 魏东芝 CHEN Miao-miao;LIN Liang-cai;MA Yu-shu;WANG Feng-qing;WEI Dong-zhi

作者机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室鲁华生物技术研究所上海200237 

出 版 物：《化学与生物工程》 (Chemistry & Bioengineering)

年 卷 期：2011年第28卷第7期

页      面：29-34页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2008AA02Z209) 

主　　题：烟曲霉 烟曲霉酸 3-甾酮-Δ1-脱氢酶 雄甾-4-烯-3,17-二酮 雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮 

摘      要：微生物转化在甾体药物合成中起着不可替代的作用,其中C1,2位脱氢是最为重要的反应类型。以烟曲霉(***)为出发菌株,运用同源序列比对从烟曲霉酸基因簇中钓取出kstDF序列。该基因与玫瑰色热微菌(Ther-momicrobium roseum)DSM 5159的kstD一致性为51%。构建pET28a(+)-kstDF表达载体,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(λDE3),获得高表达重组子菌株。经IPTG诱导、SDS-PAGE电泳分析,发现高温(37℃)有利于KstDF蛋白表达,低温(20℃)有利于酶活的保持。该重组菌显示出良好的甾体转化能力,在12 h内完全转化13.3 mg.L-1雄甾-4-烯-3,17-二酮,为构建高效转化3-酮基-4-烯类固醇的基因工程菌奠定了基础。