营养缺乏状况下干扰ASPP2通过调节自噬促进肝癌细胞增殖

作     者：梁蓓蓓 郭亚军 赵健 

作者机构：上海交通大学药学院上海200240 第二军医大学国际合作肿瘤研究所上海200433 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2013年第34卷第3期

页      面：266-270页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81030042)~~ 

主　　题：ASPP2 肝细胞癌 细胞增殖 缺营养 自噬 

摘      要：目的观察营养缺乏状况下干扰p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法构建RNA干扰抑制ASPP2的慢病毒载体表达体系并感染肝癌细胞HepG2,通过电镜观察、MTS法检测、流式细胞术检测以及形态学观察,探讨在缺乏氨基酸和血清的培养条件下干扰ASPP2表达对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响,并以自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)进行干预,探讨ASPP2下调后对细胞的作用是否与自噬有关。结果在缺乏氨基酸和血清的培养系统里,电镜观察显示干扰ASPP2后自噬泡形成明显增加(P0.05),荧光显微镜下可见GFP-LC3荧光自噬小体的表达提高(P0.05)。MTS检测显示干扰ASPP2表达后HepG2细胞的增殖能力明显增强(P0.05),而自噬抑制剂3-MA能够抑制其作用(P0.05)。形态学观察发现干扰ASPP2能够提高HepG2细胞的抗凋亡能力,应用自噬抑制剂3-MA后细胞活性明显降低,出现了细胞内颗粒物增加等一系列早期死亡的症状。AnnexinⅤ-PI双染显示干扰ASPP2使细胞凋亡率由(38±5)%下降为(15±4)%(P0.05),加入自噬抑制剂3-MA后细胞凋亡率上升至(36±3)%(P0.05)。结论在缺乏营养的状态下,下调ASPP2可能通过调节自噬促进肝癌细胞的增殖和存活。