神经元蛋白14-3-3βcDNA克隆及在原核细胞中的表达

作     者：张福萍 董小平 赵霞 赵同兴 洪涛 

作者机构：中国预防医学科学院病毒学研究所北京100052 

出 版 物：《中华神经科杂志》 (Chinese Journal of Neurology)

年 卷 期：1999年第32卷第4期

页      面：230-233页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

基　　金：国家 8 6 3高科技生物计划领域基金!86 3 10 2 1 0 3 0 5 

主　　题：C-J综合征 原核细胞 分子克隆 神经元蛋白 

摘      要：目的 利用分子克隆技术在原核细胞中研究 14 3 3 β蛋白的表达。 方法 从神经母细胞瘤细胞系中提取细胞总RNA ,RT PCR扩增 14 3 3 βcDNA ,与克隆载体pGEM T连接后测序 ,再次亚克隆至pGEX 2T表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,筛选阳性克隆 ,经异丙基硫代 β D 半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果 经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析 ,表达的融合蛋白相对分子质量为 5 3 0 0 0左右 ,能与 14 3 3 β蛋白特异性多克隆抗体发生免疫结合反应。结论 人 14 3 3 β蛋白可在原核细胞中表达 ,具有良好的免疫反应性 ,为建立克罗伊茨费尔特 雅各布病 (creutzfeld JacobDISEASE ,CJD)的辅助诊断方法及研究 14 3 3 β蛋白在CJD病分子致病机制中的作用打下了基础。