MMP-9信号肽高效诱导PEX重组蛋白在COS7细胞中分泌表达

作     者：宋琳 张志谦 SONG Lin;ZHANG Zhi-qian

作者机构：北京大学临床肿瘤学院/北京市肿瘤防治研究所北京100036 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2007年第27卷第5期

页      面：1-5页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30270658) 北京市自然科学基金资助项目(7002009) 

主　　题：基质金属蛋白酶-9 信号肽 分泌表达载体 PEX 

摘      要：为了便于收集和纯化,重组蛋白常需要引导至真核细胞外。蛋白能否分泌主要取决于其是否含有信号肽,由于不同信号肽诱导蛋白分泌的效率不同,高效信号肽的筛选已成为生物工程领域提高重组蛋白产量的重要策略之一。为了筛选诱导MMP-2C末端PEX在COS7细胞中高效分泌表达的信号肽,在PEX的N末端分别融合大鼠生长激素(rGH)、小鼠IgGκ链和人基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase9,MMP-9)的信号肽并比较三种信号肽引导PEX分泌表达的效率。Western免疫印迹和ELISA蛋白定量检测表明MMP-9的信号肽引导PEX蛋白分泌的效率约为其它两种信号肽的两倍。利用Ni-NTA亲和柱对细胞培养基中的PEX进行纯化,蛋白产量约为1mg/L,纯化的PEX重组蛋白具有抑制鸡尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)血管发生的作用。以上结果提示MMP-9的信号肽有效诱导具有生物活性的PEX重组蛋白在COS7细胞中分泌表达。