TAT-凋亡素融合蛋白的表达及其抗肿瘤活性

作     者：陶站华 刘兴汉 张宇雯 马洪星 刘远莉 栗亚 李丹 TAO Zhan-Hua;LIU Xing-Han;ZHANG Yu-Wen;MA Hong-Xing;LIU Yuan-Li;LI Ya;LI Dan

作者机构：哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室 

出 版 物：《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)

年 卷 期：2006年第22卷第7期

页      面：535-541页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 071009[理学-细胞生物学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：凋亡 凋亡素 蛋白质转导 肿瘤治疗 

摘      要：凋亡素(apoptin)由鸡贫血病毒vp3基因编码,能特异地诱导肿瘤细胞凋亡而对正常细胞没有毒性.为了获得可转导入细胞内部的凋亡素,将人工合成的编码TAT蛋白转导结构域的DNA片段与凋亡素编码基因克隆入质粒pET-28a内,构建出表达融合蛋白TAT-apoptin的原核表达载体pET-28a-TAT-apoptin.在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达融合蛋白,利用IDA-Ni2+亲和柱纯化,葡聚糖凝胶G25除去尿素后得到可溶的变性蛋白.纯化后的TAT-apoptin加入体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人肺癌Anip973细胞,对照组加入TAT-麦芽糖结合蛋白(TAT-MBP).经免疫组化检测,转导1h后TAT-MBP分布于以上两种细胞的胞浆和胞核,TAT-apoptin则主要分布于2种细胞的胞浆内,转导24h后TAT-MBP的亚细胞定位没有变化,TAT-apoptin分别定位于HUVECs的胞浆和Anip973的胞核中.脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)显示转导48h后,TAT-MBP处理过的HUVECs和Anip973细胞、TAT-apoptin处理过的HUVECs没有明显改变,而TAT-apoptin处理过的Anip973细胞大量凋亡.以上结果表明TAT-apoptin融合蛋白在肿瘤治疗上有潜在的应用价值.