杆状病毒转移载体的构建及绿色荧光蛋白在斜纹夜蛾幼虫中的表达

作     者：胡兆丽 王文兵 朱江 李新平 沈颂东 HU Zhao-Li;WANG Wen-bing;ZHU Jiang;LI Xin-Ping;Shen Song-dong

作者机构：苏州大学生命科学学院苏州215006 江苏大学生命科学研究院镇江212013 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2005年第21卷第4期

页      面：530-533页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：苏州大学"211工程"基金项目(No.XB114060)~~ 

主　　题：杆状病毒转移载体 绿色荧光蛋白 斜纹夜蛾 真核表达 

摘      要：为构建斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpltMNPV)的重组病毒,以该病毒日本C3株基因组DNA为PCR扩增模板,根据GenBankSpltMNPV中国G2株基因序列,设计了两对引物分别扩增多角体蛋白基因的5′端侧翼序列(含启动子)和3′端侧翼序列(含终止子),将这两个片段依次克隆于pUC18质粒载体后,再将绿色荧光蛋白(GFP)基因亚克隆到上述载体的多角体蛋白基因启动子和终止子之间,获得转移载体pSplt_gfp。将pSplt_gfp与野生型SpltMNPV基因组DNA共转染Spli细胞,通过同源重组和有限稀释法筛选,获得了以gfp基因替代多角体蛋白基因的重组病毒SpltMNPV_gfp。SpltMNPV_gfp感染Spli细胞和斜纹夜蛾幼虫,分别在感染24h和48h后可发现绿色荧光蛋白的表达。该重组病毒的获得,为建立斜纹夜蛾核型多角体病毒表达体系奠定了基础。