MHC-Ⅰ细胞内抗体重组腺相关病毒载体的构建

作     者：王小平 张瑞斌 朱彬 高庆贞 靖永胜 任万军 王璞 王琪 WANG Xiao-ping;ZHANG Rui-bin;ZHU Bin;GAO Qing-zhen;JING Yong-sheng;REN Wan-jun;WANG Pu;WANG Qi

作者机构：山东大学附属济南市中心医院肾脏病/血液净化中心济南250013 

出 版 物：《山东大学学报（医学版）》 (Journal of Shandong University:Health Sciences)

年 卷 期：2012年第50卷第12期

页      面：37-40,46页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30971390) 

主　　题：Ⅰ型主要组织相容性复合体 细胞内抗体 内质网 腺相关病毒 基因治疗 

摘      要：目的构建Ⅰ型主要组织相容性复合体(MHC-Ⅰ)重组腺相关病毒载体(rAAV)。方法合成内质网滞留型MHC-Ⅰ细胞内抗体的基因片段,测序正确后酶切获取该胞内抗体的基因片段,将该基因片段插入质粒pSSHG/CMV的EcoR I-BamH I位点构建pSSHG/MHC-Ⅰ。用磷酸钙共沉淀法将腺病毒辅助质1粒pFG140、包装质粒pAAV/Ad及已构建的pSSHG/MHC-Ⅰ三质粒在293细胞系中同源重组包装rAAV。采用地高辛标记的斑点杂交方法测定rAAV滴度。结果成功构建了重组病毒质粒pSSHG/MHC-Ⅰ及人类MHC-Ⅰ胞内抗体重组腺相关病毒载体(rAAV-MHCI),经蔗糖梯度离心法获得rAAV组分,梯度稀释测得滴度为6.88×1010PFU/mL。结论通过分子克隆体外重组技术成功构建了rAAV-MHCI,为下一步人体细胞实验及移植免疫的基因治疗奠定了基础。