LINC01006对肾母细胞瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的作用及其机制

作     者：赵婷 刘安生 王华 傅蔷 ZHAO Ting;LIU Ansheng;WANG Hua;FU Qiang

作者机构：西安市儿童医院血液肿瘤科西安710003 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2020年第42卷第12期

页      面：1225-1235页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：肾母细胞瘤 LINC01006 miR-148a-3p MEOX2/PI3K/Akt通路 增殖与侵袭 凋亡 

摘      要：目的探讨长链非编码RNA LINC01006对肾母细胞瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及分子机制。方法通过实时定量PCR检测肾母细胞瘤组织、细胞系中LINC01006的表达。在人肾母细胞瘤细胞中转染LINC01006的腺病毒过表达载体和siRNA,分别采用CCK-8、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)细胞增殖检测试剂盒、Transwell侵袭实验、流式细胞术检测细胞活力、增殖、侵袭及凋亡能力的变化。通过生物信息学分析预测LINC01006的靶基因,双荧光素酶报告基因分析验证预测结果;检测过表达和敲低LINC01006后miR-148a-3p及其靶基因中胚层同源盒基因(mesoderm homoobox2,MEOX2)表达水平的变化。随后,分别在裸鼠皮下注射转染腺病毒空载体和LINC01006过表达载体的肾母细胞瘤细胞系,建立小鼠移植瘤模型,测定移植瘤的体积及质量,以及肿瘤组织中LINC01006、miR-148a-3p、MEOX2和磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(phosphorylated-phosphatidylinositol-3 kinase,p-PI3K)、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸激酶,即蛋白激酶B(phosphorylated-protein kinase B,p-PKB/p-Akt)的表达。结果肾母细胞瘤组织和细胞系中LINC01006的表达水平显著低于对照组织和细胞(P0.01)。LINC01006可抑制肾母细胞瘤细胞的活力(P0.01)、体外增殖能力(P0.01)和侵袭能力[(166.00±13.75)vs(103.00±9.24),P0.05],促进细胞凋亡[(11.30±0.24)vs(37.25±1.57),P0.01]。双荧光素酶报告基因实验证实LINC01006与miR-148a-3p直接结合,而MEOX2是miR-148a-3p的靶基因。过表达LINC01006抑制了miR-148a-3p的表达[(1.07±0.02)vs(0.32±0.03),P0.01],而抑制miR-148a-3p的表达促进了MEOX2 mRNA和蛋白水平的表达(P0.01),进而抑制了PI3K/Akt信号通路的活性(P0.05)。与转染pcDNA-LINC01006组相比,共转染LINC01006和miR-148a-3p mimic组中MEOX2的表达下调(P0.01),促进了PI3K/Akt信号通路的活性(P0.01),细胞活力、增殖和侵袭能力均显著提高(P0.01),细胞凋亡能力降低(P0.01)。此外,过表达LINC01006抑制了裸鼠移植瘤的生长(P0.01)。结论LINC01006可直接与miR-148a-3相互作用并下调其表达水平,从而阻断MEOX2/PI3K/Akt通路的活性,抑制肾母细胞瘤细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡,抑制肿瘤的生长。