转化生长因子β1对小鼠失神经骨骼肌肌源性干细胞内结缔组织生长因子合成的影响:量效与时效性分析

作     者：聂铭博 陈振兵 洪光祥 Nie MB;Chen ZB;Hong GX

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院湖北省武汉市430022 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2007年第11卷第24期

页      面：4764-4767页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：中国博士后科学基金(2004035634) 教育部留学回国人员启动基金(教外司留176) 湖北省自然科学基金(2005ABA161)~~ 

主　　题：转化生长因子β1 肌源性 干细胞 结缔组织生长因子 

摘      要：目的:观察不同质量浓度转化生长因子β1作用于体外培养小鼠失神经骨骼肌肌源性干细胞后,细胞内结缔组织生长因子生成的变化。方法:实验于2006-03/06在武汉协和医院中心实验室完成。实验材料:清洁级3周龄昆明种小鼠由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供(动物使用许可证:syxk(鄂)2004-0028)。实验方法:采用差速贴壁法分离培养并鉴定小鼠失神经骨骼肌肌源性干细胞。取第2代肌源性干细胞,均匀加入6孔培养板中,每孔细胞数为104,置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养2d后,更换培养液。A～F组每孔加入含有质量浓度0,1,5,10,20,40μg/L重组人转化生长因子β1的含体积分数为0.2胎牛血清的DMEM培养基后,置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养3d。G～L组每孔分别加入含有质量浓度为10μg/L重组人转化生长因子β1的含体积分数为0.2胎牛血清的DMEM培养基后,同样条件培养箱中培养0,3,6,12,24,48h。实时荧光定量RT-PCR检测结缔组织生长因子mRNA水平,应用Westernblot检测结缔组织生长因子蛋白表达变化。结果:①Western blot检测结缔组织生长因子蛋白:可见阳性条带。A～D组平均吸光度比值随转化生长因子β1质量浓度增加而上升,组间差异具有显著性意义(0.854±0.157,1.203±0.144,2.471±0.141,3.652±0.202,P0.05)。G～J组平均吸光度比值随转化生长因子β1质量浓度增加而上升,组间差异具有显著性意义(0.788±0.123,1.063±0.143,2.154±0.153,2.997±0.136,P0.05)。结论:转化生长因子β1能够促进体外培养小鼠肌源性干细胞生成结缔组织生长因子,在1～10μg/L质量浓度范围内呈剂量依赖关系,在3～12h范围内呈时间依赖关系。