肥厚型心肌病致病基因热点突变位点Taqman-MGB探针检测方法的建立

作     者：王玉鑫 张世梅 闵婷婷 张琢奇 赵跃 WANG Yu-Xin;ZHANG Shi-Mei;MIN Ting-Ting;ZHANG Zhuo-Qi;ZHAO Yue

作者机构：大理大学基础医学院生理学与病理生理学教研室云南大理671000 

出 版 物：《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)

年 卷 期：2020年第36卷第5期

页      面：592-600页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：云南省应用基础研究计划-面上项目(No.2018FB116) 大理大学人才培养基金项目(No.KY171921501) 大理大学代谢相关疾病基础研究创新团队(No.ZKLX2020306)资助。 

主　　题：肥厚型心肌病 Taqman-MGB 基因检测 热点突变 

摘      要：肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)的分子遗传学基础为基因突变。本研究旨在建立一种用于HCM致病相关基因热点突变位点的Taqman-MGB实时荧光PCR检测方法。以HCM患者基因组为模板,根据设计好的引物进行PCR扩增,分别构建5个与HCM致病相关热点突变位点(MYH7-c.1987CT、TNNI3-c.370GC、MYH7-c.2155CT、TNNI3-c.433CG和PRKAG2-c.298GA)的野生型、纯合突变型和杂合突变型阳性质控品。以阳性质控品为模板,对5对引物和探针组合物的灵敏性、重复性和特异性进行验证。研究结果表明,对阳性质控品10倍梯度稀释(10-1~10-7),PCR扩增标准曲线R20.996;批间和批内重复性验证其变异系数均小于2%;特异性验证显示,探针与模板匹配的荧光信号较强。以上结果表明,引物探针组合物的灵敏性、重复性和特异性较好。此外,以阳性HCM患者基因组为模板,对引物探针组合物进行回复性验证,其检测结果与毛细管电泳一致。综上所述,本研究利用Taqman-MGB实时荧光PCR检测技术,建立了经济、快速、灵敏的HCM热点突变位点检测方法。该方法的建立,有助于HCM临床分子诊断、治疗和愈后评估。