辣椒中常见产毒性真菌的裸磁珠-多重实时荧光定量PCR检测方法

作     者：金燕 张薇薇 王溯源 叶正茂 张立实 裴晓方 JIN Yan;ZHANG Weiwei;WANG Suyuan;YE Zhengmao;ZHANG Lishi;PEI Xiaofang

作者机构：四川大学华西公共卫生学院卫生检验与检疫学系四川成都610041 成都医学院公共卫生系四川成都610500 食品安全监测与风险评估四川省重点实验室四川成都610041 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2015年第35卷第1期

页      面：23-28页

核心收录：

学科分类：100208[医学-临床检验诊断学] 1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81030053)~~ 

主　　题：产毒性真菌 裸磁珠富集 多重实时荧光定量PCR 辣椒模型 

摘      要：目的将多重实时荧光定量PCR技术与裸磁珠富集技术联用,建立辣椒样品中常见3类（曲霉属、青霉属、镰刀菌属）产毒性真菌的快速定量检测方法。方法根据真菌核糖体RNA（r DNA）基因序列选择真菌广谱引物及属特异性探针,联用裸磁珠富集技术,建立多重实时荧光定量PCR体系,并评价所建方法的灵敏度、特异性、重复性和一致性。结果裸磁珠-多重实时荧光定量PCR方法灵敏度高,与本研究优化后的普通实时荧光定量PCR相比提高了10倍,是原报道的100倍,直接检测辣椒样品中3类产毒性真菌的检出限均可达103CFU/ml,即104CFU/g,且特异性良好（与非目标菌无交叉反应）、重复性良好（CV〈1.5%）,该方法模拟检测辣椒样品中3类产毒性真菌的计数结果与标准培养法的计数结果相比均无统计学差异（P〉0.05）,实验过程仅需7 h（标准培养鉴定法耗时7~14 d）。结论构建的裸磁珠-多重实时荧光定量PCR方法能大大缩短产毒性真菌的检测时间,并成功应用于模拟辣椒样品中常见3类产毒性真菌的定量检测,值得进一步研究和推广。