重组人β-catenin原核表达条件的优化及生物学活性鉴定

作     者：牛夏忆 韩茂椿 李淼 陈云雨 刘晓平 NIU Xia-yi;HAN Mao-chun;LI Miao;CHEN Yun-yu;LIU Xiao-ping

作者机构：皖南医学院药物筛选与评价研究所安徽芜湖241002 

出 版 物：《微生物学杂志》 (Journal of Microbiology)

年 卷 期：2020年第40卷第1期

页      面：58-66页

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 07[理学] 071005[理学-微生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81703546) 安徽省自然科学基金项目(1808085QH265) 安徽省高校自然科学研究重大项目(KJ2019ZD30) 吉林省科技发展计划项目(20160520045JH) 皖南医学院博士科研启动基金项目(RCQD201617) 皖南医学院大学生科研资助金项目(WK2018S54) 

主　　题：β-catenin 表达优化 亲和层析 荧光偏振 酶联免疫吸附测定实验 

摘      要：优化重组人β-catenin(138~686 aa)在大肠埃希菌中的原核表达条件,经分离纯化后进行生物学活性鉴定。利用基因工程技术,将构建的重组质粒β-catenin-pET-30a(+)转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后进行β-catenin原核表达。为了提高β-catenin表达量,从诱导时间、诱导温度与IPTG诱导浓度3个单因素方面进行原核表达条件优化。β-catenin经HisTrap层析柱分离纯化后,以荧光偏振实验和酶联免疫吸附测定实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)进行生物学活性鉴定。构建的工程菌经原核表达条件优化后,确定诱导温度25℃、诱导时间10 h、0.2 mmol/L IPTG作为β-catenin最佳原核表达条件。荧光偏振实验和ELISA实验说明,纯化的β-catenin具有良好的生物学活性。本研究成功进行了重组人β-catenin原核表达条件的优化与生物学活性鉴定,为深入研究β-catenin在肿瘤免疫抵抗中的生物学功能奠定了实验基础。