自身免疫调节因子在小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞分化中的表达

作     者：马静怡 杨文江 李远迪 黄佑娇 高杰 李红 胡蓉 苏敏 Ma Jingyi;Yang Wenjiang;Li Yuandi;Huang Youjiao;Gao Jie;Li Hong;Hu Rong;Su Min

作者机构：贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州省贵阳市550025 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2020年第24卷第25期

页      面：3994-3999页

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 0403[教育学-体育学] 1002[医学-临床医学] 08[工学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 0703[理学-化学] 0836[工学-生物工程] 100215[医学-康复医学与理疗学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81660033),项目负责人:胡蓉 贵州省科技支撑计划(黔科合支撑2970号),项目负责人:苏敏 贵州省普通高校科技拔尖人才支持计划(黔教合KY字071),项目负责人:胡蓉 贵州省科技合作计划项目(黔科合LH字7363),项目负责人:李红 

主　　题：胚胎干细胞 自身免疫调节因子 胸腺上皮祖细胞 自身组织特异性抗原 

摘      要：背景:自身免疫性疾病主要是由于胸腺内自身组织特异性抗原持续表达缺失而引起强烈免疫应答的一类疾病,而胸腺功能减退和胸腺内组织特异性抗原的不稳定表达会限制治疗效果。胸腺组织主要由胸腺上皮细胞组成,但胸腺内成熟胸腺上皮细胞和胸腺上皮祖细胞有限的数量来源极大限制了相关研究。目的:研究小鼠胚胎干细胞向胸腺上皮祖细胞分化过程中自身免疫调节因子的表达变化。方法:采用两步分化方法定向诱导小鼠胚胎干细胞分化为内胚层再分化为胸腺上皮祖细胞,分别收集定向诱导分化第0,3,13天细胞,采用细胞免疫荧光、流式细胞术、Western blot、Real-Time PCR检测相关基因及蛋白的表达变化。结果与结论:①诱导分化第0天,免疫荧光检测OCT4、SSEA1表达阳性;诱导分化第3天,免疫荧光检测SOX17、FoxA2呈双阳性表达;诱导分化第13天,流式细胞术检测EpCAM1、K5、K8表达阳性;②Real-time PCR检测小鼠胚胎干细胞定向分化过程中PAX1、PAX9、FOXN1、PLET1基因表达逐渐增高;③Real-time PCR检测分化第0,3,13天AIRE基因表达升高,INS2、GAD67基因表达也升高;④Western blot检测分化第0,3,13天AIRE蛋白表达降低,胰岛素蛋白、GAD67蛋白均无表达;⑤结果表明,小鼠胚胎干细胞成功分化为胸腺上皮祖细胞,且分化而来的胸腺上皮祖细胞中AIRE基因表达很高,促进了INS2、GAD67基因的表达,为细胞移植治疗自身免疫性疾病提供评价依据。