自诱导系统在酶促合成2’-脱氧胞苷中的应用

作     者：王玺 段胜林 熊舒莉 郑桂兰 张贵友 王洪钟 Wang Xi;Duan Shenglin;Xiong Shuli;Zheng Guilan;Zhang Guiyou;Wang Hongzhong

作者机构：清华大学生命科学学院北京100084 中国食品发酵工业研究院北京100015 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2014年第30卷第11期

页      面：225-232页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(21176138) 国家自然科学基金国家基础科学人才培养基金项目(J1103506 J1030622 J1310020) 

主　　题：生物催化 N-脱氧核糖转移酶 2’-脱氧胞苷 自诱导系统 核苷类似物 

摘      要：旨在高效合成2’-脱氧胞苷(d Cyd)。DCyd作为一类重要的药物中间体,能够用于合成吉西他滨(d Fd C)、扎西他滨(dd C)等多种抗病毒或抗肿瘤的药物。采用ZYM-Fe-5052自诱导培养基对含有N-脱氧核糖转移酶II(NDT)的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导,所得完整菌体直接用于催化合成d Cyd。结果表明,自诱导系统不仅无需额外添加诱导剂,还能够达到较高的菌体密度,且与LB诱导系统所得菌体在合成d Cyd方面具有同样高效的催化活性。2’-脱氧胸苷(d Thd)和胞嘧啶的浓度比为1∶3时,产物转化率可高达86.5%。合成d Cyd的最适反应条件为:2’-脱氧胸苷(d Thd)和胞嘧啶的浓度比为1∶1.5,p H6.5的磷酸缓冲液,1 mg/m L的菌体量,终体系10 m L,30℃条件下反应1 h,产物转化率可达71.9%。此方法还可用于制备其他核苷类似物,具有广泛的适用性和应用前景。