喉黏膜间充质干细胞肌向分化的实验研究

作     者：杨润琴 明磊国 邓志宏 金岩 Yang Run-qin;Ming Lei-guo;Deng Zhi-hong;Jin Yan

作者机构：第四军医大学西京医院耳鼻咽喉头颈外科西安710032 第四军医大学组织工程中心 

出 版 物：《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》 (Chinese Journal of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery)

年 卷 期：2014年第49卷第6期

页      面：473-478页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81271065) 

主　　题：喉黏膜 间充质干细胞 声带 成肌细胞 细胞分化 

摘      要：目的 将喉黏膜间充质干细胞（laryngeal mucosal mesenchymal stem cells,LM-MSC）向成肌细胞诱导分化,为声带部分或全部缺失的组织工程修复寻求优势种子细胞.方法 从正常会厌舌面黏膜分离培养获得LM-MSC,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD44、CD105、CD90、CD29、CD34和CD45;向成脂、成骨细胞分化鉴定细胞多向分化潜能,油红O、茜素红染色鉴定成脂、成骨分化情况;加入成肌诱导液向成肌细胞方向分化,于成肌诱导分化后1周和3周时行免疫荧光化学染色,诱导后1周、3周和6周行实时定量RT-PCR分析,以分别定性和定量分析成肌分化相关蛋白及基因Myod1、Myogenin、肌球蛋白重链（myosin heavy chain,MyHc）的表达.结果 本实验分离培养获得的LM-MSC可贴壁生长,呈长梭形;高表达间充质干细胞表面分子标志物：CD44（100.0％）,CD105（90.4％）,CD90（99.9％）,CD29 （93.0％）,低表达造血系干细胞表面分子标志物：CD34（0.4％）和CD45（1.3％）;LM-MSC在体外定向向成脂、成骨分化14 d和21 d后有大量串珠样脂滴和矿化结节生成;成肌细胞初始标志蛋白Myod1和特异性标志蛋白Myogenin,MyHc分别于成肌诱导分化后1周和3周出现,RT-PCR结果与免疫荧光化学染色结果一致,并且相关基因持续表达于成肌诱导分化后6周.结论 LM-MSC符合间充质干细胞的特性,并可定向分化为成肌细胞,有潜能成为声带组织工程修复的优势种子细胞.