高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法替代微生物检定法测定硫酸新霉素效价的研究

作     者：黄敏文 侯玉荣 张倩 杭太俊 张玫 袁耀佐 HUANG Min-wen;HOU Yu-rong;ZHANG Qian;HANG Tai-jun;ZHANG Mei;YUAN Yao-zuo

作者机构：江苏省食品药品监督检验研究院南京210019 国家药品监督管理局化学药品杂质谱研究重点实验室南京210019 中国药科大学药物分析教研室南京210009 

出 版 物：《中国药学杂志》 (Chinese Pharmaceutical Journal)

年 卷 期：2020年第55卷第2期

页      面：133-140页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100704[医学-药物分析学] 10[医学] 

基　　金：国家科技重大专项“重大新药创制”资助课题(2017zx09101001) 

主　　题：氨基糖苷类抗生素 硫酸新霉素 高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法 微生物检定法 含量 效价 量效一致性研究 

摘      要：目的建立用于测定硫酸新霉素效价的高效液相色谱-脉冲安培电化学检测器法(HPLC-PAD)。方法建立并验证HPLC-PAD法,测定硫酸新霉素各主要组分含量及相关物质;采用在线膜抑制脱盐技术辅助LC-IT-TOF法测定硫酸新霉素杂质谱,结合组分活性研究确定了硫酸新霉素的主要活性组分;采用半制备液相色谱-蒸发光散射检测器串联制备硫酸新霉素B及硫酸新霉素C精制品,采用波谱手段进行结构确证;采用质量平衡法测定二者的纯度;采用三剂量抗生素微生物检定法测定B、C精制品各自的效价值,推导公式计算出硫酸新霉素的量效转换系数,设计实验进行交互作用考察及实际样品的验证。结果建立的HPLC-PAD方法在分离能力及方法的稳定性上均优于《欧洲药典》(EP)方法,适用于硫酸新霉素各组分的准确定量及有关物质检查;在线膜抑制脱盐技术成功地去除了流动相中的三氟乙酸,对硫酸新霉素的杂质谱进行研究,结合活性研究结果,确定新霉素B和新霉素C为新霉素的主要活性组分;成功制备获得新霉素B、C精制品,通过实验和计算获得了硫酸新霉素的量效转换系数,并通过了验证。结论初步实现了仪器法对微生物生物检定法的替代,基本完成了多组分氨基糖苷类抗生素硫酸新霉素的量效一致性研究工作。