香港海鸥形菌多重PCR及嵌合荧光PCR检测方法的建立与应用

作     者：沈林海 孔庆鑫 孙建荣 徐虹 金慧 韦凌娅 查捷 王英红 倪晓平 

作者机构：杭州市疾病预防控制中心杭州310021 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2015年第31卷第7期

页      面：659-662,668页

核心收录：

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：浙江省重点科技创新团队项目(2011R50021) 杭州市科技计划引导项目(2014-2)~~ 

主　　题：香港海鸥形菌 多重PCR 嵌合荧光 PCR 

摘      要：目的建立香港海鸥形菌(Laribacer hongkongensis,LH)的多重PCR(multi-PCR)及嵌合荧光法(SYBR Green I)PCR检测方法,并对其在临床及环境微生物方面的应用前景进行评价。方法通过对62株香港海鸥形菌16SRNA基因和16S-23SrRNA基因间隔区(16-23SrRNA intergenic spacer region,ISR)进行PCR扩增和多序列比对,设计两对特异性引物,建立多重PCR体系,用15种细菌性腹泻标准菌株及临床菌株进行PCR特异性和敏感性检验;并在此基础上针对两对引物分别用嵌合荧光PCR法进行浓度梯度检测,以确定最低检测限。结果香港海鸥形菌多重PCR法特异性为100%,最低检出限为5×103 CFU/mL菌液;而嵌合荧光PCR法两对引物的最低检出限均达到5×102 CFU/mL菌液。结论该法的建立为临床及环境微生物学提供了一种快速和灵敏的香港海鸥形菌检测手段。