禽脑脊髓炎病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

作     者：薄智勇 楚电峰 刘秋云 刘文亭 李智超 姚丹 冯嫣芳 BO Zhiyong;CHU Dianfeng;LIU Qiuyun;LIU Wenting;LI Zhichao;YAO Dan;FENG Yanfang

作者机构：青岛易邦生物工程有限公司 

出 版 物：《中国家禽》 (China Poultry)

年 卷 期：2019年第41卷第22期

页      面：22-25页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：青岛市动物保健品行业智库联合基金二期(18-6-3-1-jch) 

主　　题：AEV SYBR Green I荧光定量RT-PCR 病毒含量 

摘      要：利用禽脑脊髓炎病毒(Avian encephalomyelitis virus,AEV)YBF02株VPI基因序列设计一对特异性引物,通过对反应体系条件的确定和阳性质粒标准曲线的建立,建立了用于快速检测AEV含量的SYBR Green I荧光定量RT-PCR。结果显示:该方法能特异性地检测AEV YBF02株,且与其他禽类病毒无交叉反应;敏感性试验表明,该方法最低能检出10拷贝的AEV RNA模板,为普通PCR的100倍;使用该方法和鸡胚半数感染量(EID50)法对样品进行检测,二者具有良好的线性关系,且重复性试验的变异系数均小于4%。研究表明,建立的SYBR Green I荧光定量RT-PCR敏感性高、特异性强、重复性好,为AEV含量的快速检测提供了一种新的技术手段。