苯丙氨酸羟化酶基因突变的体外表达分析

作     者：张新顺 顾学范 梁黎黎 ZHANG Xin-shun;GU Xue-fan;LIANG Li-li

作者机构：上海交通大学医学院附属新华医院、上海市儿科医学研究所200092 

出 版 物：《中华医学遗传学杂志》 (Chinese Journal of Medical Genetics)

年 卷 期：2013年第30卷第6期

页      面：673-677页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

基　　金：上海市政府(2008ZD001、08JC1416100、09QA1404700、2007145) 国家高技术发展计划(2007AA022447) 国家科技支撑计划(2006BA105A09) 

主　　题：苯丙酮尿症 苯丙氨酸羟化酶 基因突变 体外表达 残余酶活性 

摘      要：目的对苯丙氨酸羟化酶（phenylalaninehydroxylase，PAH）基因7种突变（R270G、P275A、F121L、A156P、E183G、1324N和R408Q）进行功能分析，通过检测其蛋白表达及酶活性的变化，探讨突变效应和致病性质，进一步明确基因型和表型之间的关系。方法（1）应用体外定点诱变技术构建含有7种突变型PAHcDNA的表达载体，转化感受态大肠杆菌，提取质粒并测序验证。（2）将含有野生型和突变型PAHcDNA的真核表达载体pcDNA3．0瞬时转染COS-7细胞，转染48h后提取总蛋白，应用免疫印迹法检测蛋白表达量并进行酶活性分析。以野生型PAH作为参照，计算突变型PAH的蛋白表达量、残余酶活性。结果R270G、P275A、F121L、A156P、E183G、1324N和R408Q突变型PAH的蛋白表达量分别为野生型的10．5％，56．6％，54．3％，8．70o，8．5％，67．3％和85．4％。体外表达酶活性分别为野生型的7．7％，27．6％，19．0％，10．4％，9．1％，50．6％和40．2％。结论7种突变型PAH的体外表达量及酶活性相对于野生型均有明显降低，证实这7种突变均为引起PAH酶活性降低的致病性突变。