人心肌肌酸激酶MB同工酶的原核表达及纯化

作     者：李子颖 贾娟娟 刘一兵 韩世泉 

作者机构：原子高科股份有限公司医学二部北京102413 中国食品药品检定研究院化学药品检定所抗肿瘤与放射性药品室北京100050 中国原子能科学研究院同位素研究所北京102413 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2013年第26卷第7期

页      面：931-934页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 10[医学] 

主　　题：心肌 肌酸激酶 同工酶 原核细胞 基因表达 纯化 

摘      要：目的原核表达并纯化人心肌肌酸激酶MB同工酶(creatine kinase MB,CK-MB)。方法分别从含CK-M、CK-B基因片段的质粒SC319293和SC119007中扩增CK-M、CK-B基因,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白,经GST亲和层析柱纯化后,ELISA法检测其抗原性。结果重组表达质粒pGEX-4T-1-CK-MB经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达的重组CK-MB蛋白相对分子质量约110 000,表达量占菌体总蛋白的57%,主要以包涵体形式存在;纯化的CK-MB蛋白纯度大于90%,可与兔抗CK-B、CK-M多克隆抗体特异性结合。结论成功原核表达并纯化了重组CK-MB蛋白,为其大量生产奠定了基础。