蛇床子催眠活性组分对原代海马神经元细胞神经递质与钟基因表达的影响

作     者：郝雨蒙 王若瑜 仲启明 仝立国 宋美卿 杨钤 冯玛莉 HAO Yu-meng;WANG Ruo-yu;ZHONG Qi-ming;TONG Li-guo;SONG Mei-qing;YANG Qian;FENG Ma-li

作者机构：山西省中医药研究院山西太原030012 

出 版 物：《中药材》 (Journal of Chinese Medicinal Materials)

年 卷 期：2019年第42卷第5期

页      面：1133-1138页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81173574) 山西省实验动物专项资金项目[2013(K05),2014(K02)] 

主　　题：蛇床子 海马神经元细胞 体外培养 细胞凋亡 神经递质 钟基因 

摘      要：目的:观察蛇床子催眠活性组分对体外培养原代海马神经元细胞神经递质及钟基因表达的影响,探讨其催眠作用机制。方法:体外培养SD乳鼠原代海马神经元细胞,CCK-8法检测细胞活性,绘制细胞生长曲线,在细胞生长状态最佳时,经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化鉴定纯度并给药。将海马神经元细胞随机分为为空白对照组、地西泮(25μg/mL)阳性对照组及蛇床子催眠活性组分低(25μg/mL)、中(50μg/mL)、高(100μg/mL)浓度组共5组,给药24 h后流式细胞术分析海马神经元细胞早期凋亡,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液γ-氨基丁酸(GABA)、5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NA)等神经递质的含量,实时荧光定量PCR检测细胞内GABA、5-HT相关受体基因及钟基因Clock、Bmal1、Cry1、Per1、Per2 mRNA的表达。结果:体外原代培养第7天海马神经元细胞生长状态良好,鉴定纯度大于90%。与空白对照组比较,蛇床子催眠活性组分低、中浓度组海马神经元细胞凋亡率显著降低,中、高浓度组神经递质GABA、5-HT分泌及Gabra1、Gabra5、Gabbr1、5-HT1A(B)、5-HT1A(C)、5-HT1B、5-HT1D、Cry1、Per1、Per2 mRNA表达显著升高,蛇床子催眠活性组分高浓度组5-HT1A(A) mRNA表达显著升高,Bmal1 mRNA表达显著降低(P0.05或P0.01)。结论:蛇床子催眠活性组分能降低体外培养的海马神经元细胞凋亡率,增强抑制性神经递质分泌与表达,并能调节钟基因。