猪瘟病毒RT-LAMP-LFD检测方法的建立与应用

作     者：朱俊灵 叶佐东 邓洁汝 勾红潮 陈金顶 ZHU Junling;YE Zuodong;DENG Jieru;GOU Hongchao;CHEN Jinding

作者机构：华南农业大学兽医学院广东广州510642 

出 版 物：《华南农业大学学报》 (Journal of South China Agricultural University)

年 卷 期：2016年第37卷第1期

页      面：1-7页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金(U1405216 31172321和31472200) 广东省高等教育科技创新特殊项目(2012CXZD0013) 

主　　题：猪瘟病毒 NS5B基因 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条技术 病毒检测 

摘      要：【目的】建立一种新型的、能在基层场地进行实时便捷诊断的猪瘟病毒检测方法。【方法】环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)-横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)相结合,针对猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)NS5B基因设计一套特异性引物及生物素标记探针,结合异硫氰酸荧光素标记的扩增产物,建立RT-LAMP-LFD检测方法。【结果】所建立的方法能够特异地检测出CSFV的存在,检测PRRSV、JEV、PCV-2等其他病毒均为阴性;所建立的CSFV-RT-LAMP方法对RNA的最低检测限为50 pg;反应快速,整个扩增反应可在1 h内完成;操作简单,不需要PCR仪等复杂的仪器,结果可经肉眼观察。【结论】应用RTLAMP-LFD检测CSFV特异性强、灵敏度高,并且操作安全、简便、快捷,可以满足基层检疫的需要。