链格孢属小孢子种ISSR和RAPD-PCR最佳反应体系的建立

作     者：刘振亚 熊仁次 朱天生 LIU Zhenya;XIONG Renci;ZHU Tiansheng

作者机构：塔里木大学植物科学学院新疆阿拉尔843300 南疆农业有害生物综合治理重点实验室新疆阿拉尔843300 

出 版 物：《北方园艺》 (Northern Horticulture)

年 卷 期：2015年第14期

页      面：105-110页

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 

基　　金：兵团产学研重大合作科技专项资助项目(2013AA001-1) 北京市援助和田科技攻关资助项目(201106) 

主　　题：链格孢属小孢子种 ISSR RAPD 正交设计 体系优化 

摘      要：以13个链格孢属小孢子种菌株为试材,采用正交实验设计的方法,研究Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶和引物4个因素在4个水平上对链格孢属小孢子种的ISSR和RAPD反应体系的影响。结果表明:链格孢属小孢子种ISSR和RAPD的最佳反应体系为25μL的ISSR-PCR反应体系中,10×PCR Buffer 2.50μL,Mg2+浓度为2.50mmol/L,dNTPs浓度为0.10mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.25U;在RAPD-PCR反应体系中,10×PCR Buffer 2.50μL,Mg2+浓度为2.00mmol/L,dNTPs浓度为0.15mmol/L,引物浓度为0.60μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1.25U;在此基础上,对最佳反应体系的退火温度进行了筛选确定;在确定退火温度后,采用最佳反应体系,用ISSR引物UBC808和RAPD引物OPE07进行稳定性和通用性验证,结果表明该优化反应体系具有较好的稳定性和通用性。