microRNA-155在缺氧肺癌脑转移中的作用

作     者：刘洋 贾永森 秦丽娟 LIU Yang;JIA Yong-sen;QIN Li-juan

作者机构：华北理工大学基础医学院唐山063210 华北理工大学中医学院唐山063210 河北省慢性疾病重点实验室唐山063210 

出 版 物：《四川大学学报（医学版）》 (Journal of Sichuan University(Medical Sciences))

年 卷 期：2019年第50卷第6期

页      面：835-839页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金（No.81101912） 华北理工大学大学生创新创业计划项目（No.X2017153）资助 

主　　题：肺癌脑转移 hsp70 microRNA-155 紧密连接蛋白 

摘      要：目的明确缺氧与肺癌细胞释放microRNA-155的关系,揭示肺癌脑转移的可能机制。方法建立人A549肺癌细胞缺氧模型,缺氧培养肺癌细胞0.5、2、4、8、12和24 h(并设同期常氧对照组)后,免疫荧光法和Western blot法测定肺癌细胞内热休克蛋白70 (hsp70)的表达水平;建立hsp70过表达的人肺癌细胞株A549/hsp70,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定缺氧各时点A549细胞和A549/hsp70细胞培养液内microRNA-155含量。构建体外血脑屏障模型,给予缺氧不同时间点的A549肺癌细胞培养液后,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)检测体外血脑屏障模型的通透性变化;自动细胞计数仪计数Transwell下室培养液中的A549肺癌细胞数。将缺氧不同时间点的A549肺癌细胞培养液经尾静脉注入Wistar大鼠体内,Western blot法测定紧密连接蛋白occludin在脑组织血脑屏障内皮细胞中的表达水平;伊文思兰检测动物血脑屏障通透性改变。结果肺癌细胞缺氧8 h时,肺癌细胞内hsp70和培养液内microRNA-155的表达均达最高水平(P0.05)。与A549细胞相比,缺氧2~24 h时,A549/hsp70细胞培养液内microRNA-155含量的增加更显著。缺氧8 h,血脑屏障通透性最大,透过血脑屏障模型的肺癌细胞数最多。在动物水平,给予缺氧8 h的肺癌细胞培养液后,动物脑组织血脑屏障内皮细胞的occludin表达最低,且此时实验动物的血脑屏障通透性亦最大。结论缺氧可引起肺癌细胞内hsp70生成增多,促进了microRNA-155的表达,进而导致血脑屏障occludin表达减少,血脑屏障通透性增大,最终引起肺癌细胞转移入脑。